荧光光谱法研究中华蜜蜂化学感受蛋白与特异配基的相互作用.pdfVIP

V01．32 高等学校化学学报 No．6 2011年6月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSmES 1284～1288 荧光光谱法研究中华蜜蜂化学感受 蛋白与特异配基的相互作用 李红亮，张林雅，朱丽云，倪翠侠，商晗武 (中国计量学院生命科学学院，生物计量及检验检疫技术浙江省重点实验室，杭州310018) naphthylamine，1．NPN)的相互作用．结果表明，I-NPN能使CSP3在A。。=328nm处发生荧光猝灭，且猝灭机 理为静态猝灭．另外，猝灭过程的△no0，ASo0，表明二者问的主要作用力为疏水相互作用．依据FOrster 非辐射能龟转移机制得到二者的结合距离为9．3am，能量转移效率E=0．054．采用同步荧光光谱和圆二色 光谱考察了l—NPN对CSP3构象的影响，CSP3的荧光主要来源于色氨酸残基，且最大发射波长略有红移，表 明结合位点微环境的极性增加，且CSP3的Ot·螺旋比例相应减少，从而使CSP3构象发生变化． 关键词中华蜜蜂；化学感受蛋白；相互作用；荧光光谱 中图分类号0657．3 文献标识码A 文章编号0251-0790(2011)06-1284-05 的小分子荧光配基，利用该荧光配基可以筛选获知潜在的化学感受系统中可溶性蛋白的生理配基，从 而为研究生物体内参与化学感受的活性蛋白分子的生理功能提供参考．昆虫化学感受系统中的可溶性 种昆虫生理机制如化学识别、发育及生理调节过程中发挥作用【3J．尽管已有文献拉1报道了利用l-NPN 进行化学感受系统蛋白生理功能的研究，但是对于1一NPN与化学感受蛋白相互作用的详细机制尚未见 cerana 文献报道．中华蜜蜂(Am ￡，简称意蜂)具有更灵敏的嗅觉、敏锐准确的鉴别能力和强烈的排异性，且对于严重危害意蜂的主要 寄生螨——狄斯瓦螨具有非常强的适应抗性．中蜂的这种排异行为以及抗螨过程均与其化学感受行为 紧密相关，化学感受蛋白CSPs有可能参与了这一独特的生理行为．我们在前期工作中H1已经从中蜂 工蜂的触角中克隆并成功获得了体外重组中蜂化学感受蛋白3(CSP3)基因，并对其时空表达谱进行了 研究【5J．在此基础上，本实验对CSP3重组蛋白进行了重新诱导、纯化和定量，并利用荧光光谱法研究 了CSP3与l—NPN的相瓦作用机制及作用模式，并计算得到二者的结合距离及其对蛋白构象的影响等， 为进一步研究其它生理性配基与中蜂化学感受蛋白的相互作用，以及深入阐明中蜂化学感受系统对外 界化学因子的识别机理提供了一定的理论依据和实验基础． 1 实验部分 1．1试剂与仪器 Milli—Q超纯水配制．RF-5301 收稿13期：2010-07—16． 学基金(批准号：Y307597)资助． 联系人简介：商晗武，女，博士。研究员，主要从事昆虫化学生态学及分子生物学研究．E—mail：hwshang@ejh．edu．cn 万方数据 、¨-6 {“毫莘：t≈≈谱*HZ十一}g#*学粤圣§自^抖#＆§∞“§∞月 285 s‘㈣u r公司)：PB-10型精密I，H}I_鹱BS224S精衍电于分析^、F(缚围磷多fU斯公可) 1 2实验过程 2 r定 4)透析J{浓缩后JBradbrd“：对蛋白进i 将重组中蜂f：sP3蛋白分离，以PBS缓^ll溶液(I州=7 饿．得到浓度为20×IO’md／L的待测蚩A样品 1 2 0mmol／I．的耻液Jt揽于4℃F避 2蹙光光话和唆姨七漕剥定川11‘孵将1-NPN荧光配牡dC成1 6 5x10mol／L中蚌cSP3重组蛋白r石英比乜m-hJ}』做量 光保存咎取3ⅢL埘P