第六章 兽药残留检测技术 苯并咪唑类1.ppt

第六章 兽药残留检测技术 第七节 苯并咪唑类药物残留的危害分析与检测方法 一、概述 苯并咪唑类(Benzimidazoles，BEN)是一种驱虫剂,被广泛应用于动物寄生虫的治疗,同时还作为杀霉菌剂应用于庄稼存贮和运输期间,使其免受霉菌污染。 自20世纪60年代早期,美国合成噻苯达唑以来,已合成数百种苯并咪唑类驱虫药。噻苯达唑作为第一个商品化的苯并咪唑类药物,曾广泛用于世界各地,用以驱除各种动物(如牛、绵羊、山羊、猪、马、禽等)胃肠道寄生虫。用于治疗时可一次内服给药,也可以低浓度置于饲料中长期使用做预防用。 由于噻苯达唑驱虫作用不强,用药剂量较大,且驱虫谱不广,目前,已逐渐为其他苯并咪唑类药物——阿苯达唑、奥芬达唑、芬苯达唑、甲苯达唑、氟苯达唑等所取代。 本类药物的特点是驱虫谱广,驱虫效果好,毒性低,甚至还有一定的杀灭幼虫和虫卵作用。 苯并咪唑类中的帕苯达唑、坎苯达唑、阿苯达唑和奥芬达唑对妊娠早期(约妊娠三周)绵羊的胎儿有致畸作用,因此用于孕畜时应特别慎重。 苯并咪唑类药物的结构式 苯并咪唑类药物是一个庞大的化学家族,包括噻苯达唑的同系物、苯并咪唑氨基甲酸酯类,以及苯并咪唑环上的各种侧链取代物。 苯并咪唑类药物 1、噻苯达唑(Thiabendazole, TBZ) 2、坎苯达唑(Cambendazole, CAM) 3、苯硫脲酯(Thiophanate) 4、非班太尔(Febantel, FEB) 5、芬苯达唑(Fenbendazole, FBZ) 6、奥芬达唑(OxfendazoIe, OFZ) 7、阿苯达唑(Albendazole, ABZ) 8、甲苯达唑(Mebendazole, MBZ) 9、奥苯达唑(Oxibendazole, OXI) 10、氟苯达唑(Flubendazole, FLU) 11、三氯苯达唑(Triclabendazole, TCB) 二、组织中苯并咪唑残留和限量 苯并咪唑类药物在动物体内的残留物与药物本身有关外,还与给药途径、靶组织和消除期有关。 标志残留定义为母体药物及其主要代谢产物的总和。 部分苯并咪唑类药物的标志残留和最高残留限量(MRL) 三、样品处理 苯并咪唑类分子含咪唑环结构,两个氮原子具有酸碱两性,在适当的pH条件下,分子可以质子化(pKa约5~6)或去质子化(pKa约12)。 在酸性或碱性条件下,大部分苯并咪唑类药物可解离,易溶于水性溶剂,并被提取,然后调节pH值使呈中性,用乙酸乙酯抽提。 由于5-OH-TBZ在pH值范围内都能电离,易溶于酸性或碱性的水溶液,乙酸乙酯很难将其抽提出来。 对于CAM、TCB和TCB代谢产物,它们都有两个或更多的pKa,因此溶剂提取时,控制溶液的pH值尤为重要。 三氯苯达唑(TCB)、三氯苯达唑硫化物(TCB-SO)、 TCB-SO2和CAM分别在pH7.3~10.9、5.0~9.0、3.8~8.0和7.4~11.1呈中性,因此,只有当pH7.4~8.0时,所有这些分子都呈中性。 大部分苯并咪唑类药物在pH8时都呈中性,当预测某些苯并咪唑类药物的pKa约为8时,这时欲对这些组分同时提取变得相当困难。 但也有例外,如MBZ-NO2和OXI在pH8.6和8.3,以非电离形式存在。 1、水解 肝和奶样中苯并咪唑类药物与蛋白结合率较高,不易被有机溶剂提取,可先将样品水解后再提取游离的药物。 常用的水解方法有酸水解和酶水解两种。 酸水解通常使用无机酸,例如用4moL/L盐酸于80~110℃ ,在1~4h即可完成水解。 酸水解具有简便、快速、水解完全等优点,因而被广泛采用。 酶水解 酶水解通常使用β-葡糖苷酸酶或芳基硫酸酯酶,前者可专一地水解葡萄糖醛酸苷结合物,后者可水解硫酸酯结合物。 由于肝样中通常存在上述两种结合物,常使用β-葡糖苷酸酶/芳基硫酸酯混合酶,控制pH4.5~7.0,于一定温度下孵育18~72h。 与酸水解相比,酶水解比较温和,一般不会引起药物的分解,但有时水解不完全和实验费用高是该法的缺点。 Tocco等发现TBZ在尿和奶中的代谢产物主要是5-OH-TBZ与葡糖苷酸和硫酸酯结合物,结合物用β-葡糖苷酸酶/硫酸酯酶或酸(6mol/L盐酸回馏1h)水解,释放出游离的5-OH-TBZ。 Chuckwudebe等对TBZ在蛋鸡和奶牛中代谢产物进行了研究,发现结合物主要是硫酸酯结合物。 Markus等对肝样中的ABZ及其相关代谢物的结合物用酸解方法进行水解,释放出游离的ABZ-NH2-SO2。 Coulet等对组织中的TBZ蛋白结合物用碱解方法水解。 2、提取及净化 液-液萃取(LLP)是提取苯并咪唑类药物的最常用方法,通常将水性溶液调节至适当的pH值,用水不相溶的有机溶剂提取。 用酸溶液提取时,即包括了样品的水解过程。 由于苯并咪唑类药物的极性和pKa