丙泊酚对大鼠局脑缺血后线粒体膜电位及ROS生成的影响.docVIP

  丙泊酚对大鼠局脑缺血后线粒体膜电位及 ROS 生成的影响# 于巍，李军，李雪婷，戚思华** 5 （哈尔滨医科大学附属第四医院，哈尔滨市 150001） 摘要：目的 观察丙泊酚对大鼠局脑缺血后线粒体膜电位及 ROS 生成的影响。 方法 18 只健康雄性 Wistar 大鼠，体重 250～300g。采用线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞 (MCAO)模型，缺血 2h 后断头取脑，分离额叶缺血核心区和对侧相同部位的脑组织。Percoll 10 15 梯度密度离心法差速分级离心制备脑组织线粒体悬液。用荧光染料 NAO 标记线粒体后，流 式细胞仪对线粒体悬液进行纯度测定，弃用纯度偏低（小于 95%）的样本，随机分为三组 （n=6），即缺血侧脑皮质线粒体三组（A、B、C 组），对侧脑皮质线粒体三组（、、 组）。取 30μg 线粒体加入 0.3ml 反应缓冲液中孵育 2min 后，分别进行不同的处理。其 中，A 组和组不做任何处理；B 组和组加入荧光染料 TMRM 于 37下孵育 10min，或 是加入荧光染料 H2DCHDA 于 37下孵育 30min；C 组和组加入丙泊酚于 37下孵育 2min 后，加入荧光染料 TMRM 于 37下孵育 10min，或是加入荧光染料 H2DCFDA 于 37下孵 育 30min。流式细胞仪分析各组线粒体 TMRM 和 DCF 的荧光强度值，其中，TMRM 的荧 光强度值代表线粒体的膜电位，DCF 的荧光强度值代表线粒体的活性氧簇生成量。结果 各 组线粒体纯度大于 98%(P0.05)；与对侧区脑组织线粒体相比，缺血区脑组织线粒体膜电位 20 25 30 35 40 45 较低 (P0.05)，活性氧簇生成量较高 (P0.05)；丙泊酚升高缺血区脑皮质线粒体膜电位 (P0.05)，降低活性氧簇生成量 (P0.05)；丙泊酚升高对侧区脑皮质线粒体膜电位 (P0.05)， 而对 ROS 生成量无明显影响( P0.05)。 结论 丙泊酚能够抑制大鼠局脑缺血线粒体活性氧 簇的生成，提高局脑缺血线粒体的膜电位，从而改善线粒体的功能，这可能是丙泊酚脑保护 作用的机制之一。 关键词：丙泊酚；局脑缺血；线粒体；活性氧簇；膜电位；流式细胞仪 中图分类号：R362 The effects of propofol on alterations in membrane potential and reactive oxygen species in mitochondria isolated from brain subregions during focal cerebral ischemia in rat YU Wei, LI Jun, LI Xueting, QI Sihua (The Fourth Affiliated Hospital, Harbin Medical University, Harbin, 150001) Abstract: Objective To observe the effects of propofol on membrane potential and reactive oxygen species in mitochondria isolated from brain subregions during focal cerebral ischemia in rat. Methods Eighteen Wistar rats (weight 250~300g) were recruited after 2 h of focal ischemia. The focal cerebral ischemia was induced by an intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) technique. The cortical focal tissue and the same position from the contralateral hemisphere were quickly removed, and then the mitochondria were isolated by the procedures that combine differential centrifugation and discontinuous Percoll density gradient centrifugation. As the mitochondria were detected by flow cytometric, the low Purity (95%) of the preparat