Pg感染口腔上皮细胞差异表达基因的筛选.docVIP

  Pg 感染口腔上皮细胞差异表达基因的筛选# 王洁1，高雳1，齐霞1，吴亚菲1,2，赵蕾1,2** （1. 四川大学华西口腔医院牙周科，成都 610041； 5 10 15 20 2. 四川大学口腔疾病研究国家重点实验室，成都 610041） 摘要：目的 牙龈卟啉单胞菌 Porphyromonas gingivalis , P.gingivalis）是牙周病主要致病菌之 一，目前公认，P.gingivalis 感染宿主过程中，可呈时序性表达多种毒力因子，从而完成黏附 和定植、逃逸宿主免疫防御系统、诱导宿主细胞异常表达各种炎症介质等一系列致病过程， 最终导致牙周组织的破坏。从基因组角度比较 P.gingivalis 感染宿主上皮细胞前后基因表达 调控的差异，可更加全面地筛选感染过程中发挥毒力作用的 P.gingivalis 致病因子。本研究 拟采用差异显示反转录 PCR (differential display reverse transcription PCR, DDRT-PCR)技术， 鉴定 P.gingivalis 侵入口腔上皮细胞前后全基因组中的差异表达基因，初步筛选可疑致病基 因。 方法 常规细菌厌氧培养技术培养 P.gingivalisATCC33277，常规细胞培养技术培养 KB 细胞； 提取 P.gingivalis 与 KB 细胞共培养 18 小时前后细菌总 RNA，采用 DDRT-PCR 筛选 P.gingivalisATCC33277 侵入 KB 细胞前后差异表达条带，测序结果经 BLAST 分析，初步筛 选差异基因。 结果 获得三条差异基因，两条分别与 PG0683 和 PG0159 有大于 95%的同源性，一条未找 到同源性基因序列。 结论 P.gingivalisATCC33277 侵入 KB 细胞前后可引起细菌基因的表达变化，DDRT-PCR 技 术可用于筛选 Pg 差异表达基因。 关键词：牙周病；牙龈卟啉单胞菌；口腔上皮细胞；基因组；DDRT-PCR 中图分类号：R781.4+ 25 Identification of specific genes of Porphyromonas gingivalis during the process of infecting oral epithelial cells WANG Jie1, GAO Li1, QI Xia1, WU Yafei1,2, ZHAO Lei1,2 (1. Department of Periodonticis, west china hospital of stomatology, ChengDu 610041; 30 35 40 45 2. key laborotary of oral disease,Sichuan University, ChengDu 610041) Abstract: Objective Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) ， one of the most important periodontal pathogens, could express a variety of virulence factors during the process of infecting the host cells. These virulent factors may help P.gingivalis colonize in the subgingival circumstance, adhere to the host cells, escape the host immune defense system, and may induce host cells to express several inflammatory mediators, then leads to destruction of periodontal tissue. It is more comprehensive to scan and identify the specific virulence factors of P.gingivalis in accordance with the differences of the whole genome gene expression before and after the contaction of P.gingivalis to host cell.In the present study, differential display reverse transcription PCR (DDRT-PCR) was