利用家蚕生物反应器表达猪瘟病毒E0和E2蛋白及其免疫原性分析.docVIP

  利用家蚕生物反应器表达猪瘟病毒 E0 和 E2 蛋白及其免疫原性分析# 王军军1,2，王美惠1,3，陈剑清1,2，张耀洲1,2** 5 10 15 20 25 30 35 40 45 （1. 浙江理工大学生命科学学院，杭州 310018； 2. 天津市国际生物医药联合研究院，天津 300457； 3. 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018） 摘要：猪瘟病毒囊膜蛋白 E0 和 E2 是猪瘟病毒的两个重要结构蛋白，在猪瘟病毒的传播中具 有关键性作用。E0 蛋白具有 RNA 酶活性，会导致动物上皮和淋巴细胞凋亡，引起免疫抑制。 E2 蛋白是猪瘟病毒的主要保护性免疫原，可以诱导机体产生中和抗体。以 pvl-E2-2a-E0 质 粒为模板获得猪瘟病毒 E0 基因和 E2 基因，将两片段分别插入到经过改造的 pFastBac 1 质 粒的信号肽（SP）和跨膜区（TM）之间，成功构建重组 pFastBac1-SP-E0-TM 质粒和 pFastBac1-SP-E2-TM 质粒，将两重组质粒转化大肠杆菌 DH10Bac 细胞，在细胞内发生转座， 获得重组穿梭载体 Bacmid E0 和 Bacmid E2，重组穿梭载体转染家蚕 BmN 细胞，培养后获得 重组杆状病毒 BmNPV-E0 和 BmNPV-E2，将病毒以中等感染复数接种家蚕蛹，待其发病后纯化 重组病毒粒子免疫 Balb/c 小鼠制备血清抗体，通过 ELISA 检测发现抗体效价达到 1：1600 （BmNPV-E0）和 1：3200（BmNPV-E2），表明所获得的两种重组病毒均具有良好的免疫原性。 本实验说明利用家蚕蛹作为生物反应器，可有效表达猪瘟病毒 E0 囊膜蛋白和 E2 囊膜蛋白， 为制备新型猪瘟疫苗奠定了基础。 关键词：猪瘟病毒 E0；猪瘟病毒 E2；重组杆状病毒；家蚕生物反应器 中图分类号：Q78 Expression of Classical Swine Fever Virus E0 and E2 Protein in Silkworm Bioreactor Separately and Their Immunogenicity Study Wang Junjun1,2, Wang Meihui1,3, Chen Jianqing2, Zhang Yaozhou1,2 (1. Institute of Biochemistry, Zhejiang Sci-tech University, HangZhou 310018; 2. TJAB, TianJin 300457; 3. Zhejiang Provencial Key Laboratory of Silkworm Bioreactor and Biomeicine, HangZhou 310018) Abstract: Envelope glycoproteins E0 and E2 of classical swine fever virus (CSFV) play a major role in the spreading of the virus. E0 is with the activity of RAase. It can suppresses the immune system by leading to the apoptosis of the epithelial and lymphatic cell. E2 is the main immunogen for preparing vaccine, and it can provokes immune systems into creating antibodies to ward the CSFV. In our research, the pvl-E2-2a -E0 was used as template to obtain the E0 and E2 gene, each of which was cloned into pFastBac 1-sp-Tm, to construct recombined vectors pFastBac1-SP-E0-TM and pFastBac1-SP-E2-TM. The new vectors were transformed into DH10Bac separately, in which they recombined with Bacmid, and produced recombined vectors Bacmid E0 and Bacmid E2. Bacmid E0 and Bacmid E2 were transfected into BmN