基于酪胺信号放大技术的沙门氏菌可视化检测新方法.docVIP

  基于酪胺信号放大技术的沙门氏菌可视化 检测新方法# 陶醉，袁京磊，王周平** 5 10 15 20 25 30 35 （江南大学食品学院，江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122） 摘要：沙门氏菌是引起世界各地食源性疾病爆发事件的最常见原因，涉及人群范围广，危害 性和严重性较大。传统的沙门氏菌检测技术需 4-7 天，不能满足及时、快速检测食品安全性 的需求。本文基于寡核苷酸探针杂交、酪胺放大技术和辣根过氧化物酶（HRP）底物显色反 应构建了一种沙门氏菌快速可视化检测新方法。利用生物素-亲和素反应将杂交产物固定在 微孔板上，利用 HRP 催化酪胺在反应位点大量沉积、放大反应信号，再利用 HRP 的生色底物 TMB 对目标物进行显色检测。本方法检测线性范围为 1-1000 pmol/L，检测限为 0.5 pmol/L。 关键词：食品检验；可视化检测；酪胺；沙门氏菌；DNA Novel methods for visual detection of Salmonella based on tyramine signal amplification TAO Zui, YUAN Jinglei, WANG Zhouping (State Key Laboratory of Food Science and Technology, School of Food Science and Technology, Jiangnan University, JiangSu WuXi 214122) Abstract: Salmonella is the most common reason to cause foodborne diseases worldwide with relatively harmfulness. Traditional detection method of Salmonella needs 4-7 days, cannot achieve the short-term test towards food safety. Based on oligonucleotide probe hybridization, tyramine signal amplification and color reaction of horseradish peroxidase（HRP) substrate, we proposed a novel method for visual detection of Salmonella. First, oligonucleotide probe was fixed in microwell plates by biotin-avidin system. Then, a large amount of boitin-conjugated tyramine was deposited at the site of enzyme reaction under HRP catalysis. Finally, TMB was added and color reaction was performed. The linear range of the detection covers a large variation of target concentration from 1 pmol/L to 1000 pmol/L and the detection limit of 0.5 pmol/L is obtained. Keywords: food analysis; visual detection; tyramine; Salmonella; DNA 0 引言 沙门氏菌属于肠杆菌科细菌，广泛分布于自然界中，在 20~30 ℃ 条件下可迅速繁殖， 在动物粪便中可生存 1~2 个月，在冰冻土壤中可越冬[1,2]。沙门氏菌引起的沙门氏菌病是公 共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一。据欧洲食安局的总结报告，沙门氏菌是欧洲食 源性疾病爆发事件的最常见原因[3]。在我国细菌性食物中毒中，70%~80%是由沙门氏菌引起 [4] 30.6%[5]。 国标法是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法。此法通过预增菌、选择性增 菌、分离、平板划线培养、然后对平板上肉眼可见的特征性菌落进行确认，并进行生化和血 清检测以做出鉴定 [6] 40 时、快速评价食品中微生物安全性的需求。 基金项目：国家“十二五”科技支撑计划项目(2012BAK08B01)，江苏省科技支撑计划项目(BE2011621, BE2010679)，教育部“新世纪优秀人才支持计划” (NCET-11-06