免疫学诊断与预防.pptVIP

(1)外周血单个核细胞的分离 采用葡聚糖－泛影葡胺（分离液）密度梯度离心法 (2) 淋巴细胞亚群的分离 尼龙棉分离法 E花环分离法 洗淘法 流式细胞术 是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 磁分离技术 流式细胞仪的工作原理 二、淋巴细胞的功能测定 T细胞功能测定 增殖试验 3H－TdR掺入法 MTT法 细胞毒试验 皮肤试验 以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，剌激体内致敏T细胞分化增殖，释放淋巴因子，引起局部皮肤的IV型超敏反应 B细胞功能检测 抗体形成细胞的测定－溶血空斑试验 溶血空斑实验是体外检测单个抗体形成细胞（B淋巴细胞）的一种方法，即将经绵羊红细胞（SRBC）免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37℃作用下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。该试验可检测机体产生抗体的能力。 免疫诊断方法的应用 一、疾病诊断 1、感染性疾病 各种病原体感染后，体内能检出特异 抗体或抗原，因此抗原抗体反应广泛用于感染的确定、 传染病的诊断、传染后免疫力的确定等。 2、免疫缺陷病 免疫细胞的鉴定、计数以及功能试验 可帮助免疫细胞缺陷的诊断。 3、肿瘤，自身免疫疾病 二、免疫学监测 感染性疾病的免疫学监测有助于疾病的 转归与预后判定，如监测乙型肝炎病毒抗原与抗体的消 长有助于乙型肝炎的预后判定，HIV感染者的CD4＋细胞 计数有助于艾滋病的诊断、病情分析、疗效判定。 2、类毒素（Toxid） 细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留其免疫原性。 白百破：白喉类毒素+ 百日咳杆菌死疫苗+破伤风类毒素 1、免疫增强剂 免疫增强剂（IPA）：是增强、促进和调节机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于恶性肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。 抗体，分子疫苗 细胞因子：IL－2，干扰素 生物应答调节剂：能促进或调节免疫功能的生物制剂 转移因子：存在于人和动物白细胞中的可透析小分子物质 ,能将供 体所具有的细胞免疫功能转移给受体 ,从而提高受体的免疫功能。TF属多肽类物质 卡介苗 胸腺肽 真菌多糖 中草药 * 第七章 免疫学诊断与预防 第一节 免疫诊断 一、抗原与抗体的检测 二、淋巴细胞的测定 三、诊断方法的应用 第二节 免疫防治 一、免疫学预防 二、免疫学治疗 第一节 免疫诊断 一、抗原与抗体的检测 1、抗原抗体反应的特点： 特异性 可逆性 比例性 阶段性 一、体外免疫学检测 1、抗原抗体反应的特点： 特异性、可逆性、比例要适宜 抗体过剩 比例适当 抗原过剩 抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系 2、常见检测法 （1）凝集反应 间接凝集和间接凝集抑制试验 （2）沉淀反应 单向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验 对流免疫电泳 - + （3）补体结合反应 补体结合反应 （4）免疫标记技术 免疫荧光直接法 免疫荧光间接法 a、免疫荧光技术 b、免疫酶技术 1、包被抗体 洗 2、加抗原 洗 3、加酶标抗体 洗 4、加底物显色 1、包被抗原 洗 2、加抗体 洗 3、加酶标抗 球蛋白 洗 4、加底物显色 ELISA双抗体夹心法 ELISA间接法 C 放射免疫测定法（RIA） 放射免疫测定法（RIA）是将放射性核素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫标记技术。 D：免疫印迹法：Western印迹法 （二）淋巴细胞检测 一、淋巴细胞的类别鉴定 光学系统 激光光源 光收集系统 液流系统 流动室 液流驱动系统 电子系统 光电转换 数据处理系统 细胞分选系统 淋巴细胞转化试验 T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)或特异性抗原刺