张英彪硕士毕业答辩.pptVIP

提 纲 研究背景 研究目标 实验流程 实验结果 结 论 研究背景 抗磷脂综合症（APS）是1986年确立的一种隶属于系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus; SLE）的自身难治性免疫疾病，在APS中动脉粥样硬化与血栓形成过程中，致血栓性抗β2-糖蛋白I（β2-glycoprotein I, β2-GPI）自身抗体识别β2-GPI-oxLDL（oxidized low density lipoprotein，oxLDL）复合体导致的巨噬细胞胆固醇摄取和泡沫化是一个关键事件和重要环节。 研究背景 研究背景 7-ketocholesteryl-9-carboxynonanoate 是从oxLDL上分离的一类脂类物质，作为介导oxLDL与β2-GPI结合形成复合体的主要特异性配体，命名为oxLig-1。 研究目标 rβ2-GPI第V结构域蛋白的获取。 oxLig-1 / β2-GPI (rβ2-GPI domain V) 模型 建立。 rβ2-GPI dmain V对oxLig-1 / β2-GPI复合体 的竞争性抑制。 oxLig-1的化学合成 7-ketocholesteryl-9-carboxynonanoate （oxLig-1）的化学合成。 β2-GPI 第V结构域蛋白原核表达 rβ2-GPI DV结合CL活性鉴定 rβ2-GPI DV结合oxLig-1活性鉴定 rβ2-GPI DV抑制oxLig-1/β2-GPI 复合体形成 结论 采用原核表达系统中的pET-32a载体构建了β2-GPI第V结构域表达载体，并在宿主菌Rosetta-gami中通过IPTG诱导得到活性rβ2-GPIDV; rβ2-GPIDV通过与oxLig-1形成复合体竞争性抑制oxLig-1 / β2-GPI /鼠源抗体/APS患者抗β2-GPI抗体复合物的形成； 综上所述，rβ2-GPI DV通过抑制oxLig-1 / β2-GPI / APS患者抗β2-GPI自身抗体复合物的形成从而抑制巨噬细胞的泡沫化，达到抗动脉粥样硬化效果，因此rβ2-GPI DV可能会成为抗动脉粥样硬化的重组工程蛋白药物。 攻读硕士期间发表的论文及专利 Yingbiao Zhang , Wenzhe Li , Yan Chi , Renjun Wang , Dan Wang, Fan Zhang , Zhe Liu , Eiji Matsuura and Qingping Liu Recombinant domain V of β2-glycoprotein I inhibits the formation of a 7-ketocholesteryl-9-carboxynonanoate and β2-glycoprotein I complex. Journal of Biochemistry Zhenyu Huang , Qingping Liu , Wenzhe Li , Renjun Wang , Dan Wang, Yingbiao Zhang, Fan Zhang , Yan Chi , Zhe Liu , Eiji Matsuura , Zibo Liu , Qiming Zhang. 7-ketocholesterol induces cell apoptosis by activation of nuclear factor kappa B in mouse macrophage. Acta Medica Okayama Dan Wang, Wenzhe Li, Renjun Wang, Yan Chi, Fan Zhang, Zhe Liu, Yingbiao Zhang , Eiji Matsuura and Qingping Liu. 7-ketochoresteryl-9-caboxynonanoate enhances the expression of ATP binding cassette transporter A1 via CD36. Journal of Lipid Research 刘庆平，张英彪，李文哲，迟彦 专利：具有预防治疗动脉粥样硬化作用的重组蛋白表达与纯化 申请号：200910187943.9 致谢 本论文是在导师刘庆平教授的悉心指导下完成的。在此向我的导师表示诚挚的敬意和衷心的感谢！ 特别感谢李文