马端医学国家自然科学基金申报攻略.pptVIP

研究内容 做什么？ 围绕研究目标进行 小题大做 要有层次：如基因转录水平、蛋白质表达水平、细胞水平、动物模型、人体。 内容要细化 制备血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠：将TFPI-1 LoxP小鼠和血管内皮细胞Tie2-Cre转基因小鼠交配，获得血管内皮细胞TFPI-1基因条件敲除杂合子和纯合子小鼠，应用Southern Blot和PCR方法进行基因型鉴定。 血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠不同发育阶段血管内皮细胞表型和血管形成变化分析：取E12小鼠胚胎、出生后当天小鼠、3.5周龄幼鼠和7周龄性发育成熟小鼠，处死后分别取主动脉、心脏、肺脏和大脑，分别对各部位血管进行病理学和电子显微镜检测。应用TUNEL法原位检测血管内皮细胞的凋亡情况。 血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠对细菌内毒素的反应：选择6-7周龄发育成熟小鼠，静脉注射小、中和大剂量细菌脂多糖LPS，取血处死小鼠，检测血液中关键炎症因子NF-кB、TNF-α和IL-1β水平，病理学检测肺脏和大脑的炎症情况。 乳腺癌细胞在血管内皮细胞TFPI-1条件基因敲除小鼠血液中转移能力的评价：选择6-7周龄发育成熟小鼠，静脉注射三种不同数量的MDA-MB-231乳腺癌细胞，饲养4-6周后处死，取肺脏进行病理学检测，观察乳腺癌转移情况。 拟解决的关键问题 关键科学问题与关键的技术问题 与研究目标和研究内容相对应，