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生物技术诊断制剂 姓名 何俊 导师 黄毓茂 学号 2004228044 专业 预防兽医传染病 生物技术诊断制剂 随着分子生物学的飞速发展，新型诊断技术不断涌现，与之相配套的生物技术诊断制剂也应运而生，尤其是基于分子水平的诊断制剂发展迅猛。生物技术诊断制剂大致包括 重组表达抗原（recombinant antigen）、 核酸探针（nucleic acid probe, gene probe）、 聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR） 基因芯片（gene chip）等。 生物技术诊断制剂不仅特异性强，而且可以获得常规方法无法制备的一些诊断制剂，或能克服常规程序制备的诊断制剂的缺陷。同时，基于生物技术制备的诊断制剂易于标准化、产业化。 一、重组表达抗原 基因工程重组表达抗原是用DNA重组技术，将编码特定抗原的基因插入原核或真核表达质粒，再转入宿主细胞中使其高效表达，然后运用生物化学分离、纯化技术，提取表达产物等，最终制成诊断用重组表达抗原。 近年来，重组表达抗原已显示出独特的优越性，具有高特异性、高纯度、均质性好、重复性强、成本较低、并可大批量生产等优点，尤其是应用这一制造技术获得了常规方法无法制备的诊断抗原，如乙型肝炎病毒等一些病原体尚无法获得纯培养，但应用生物技术已制备出标准的乙型肝炎各组分诊断抗原， 对人兽共患病特别是高危险病原体（如免疫缺陷病毒、结核分枝杆菌、炭疽杆菌等）的诊断抗原制备，应用生物技术更是具有无可比拟的优点。重组表达抗原的发展前景十分广阔。 二、核酸图谱分析 核酸图谱分析包括核酸电泳图谱、核酸酶切图谱、寡核苷酸指纹图谱等。 适用于这些诊断技术的试剂，主要是核酸提取、酶切、电泳等生化和分子生物学试剂，商品化程度已很高。 （一）核酸电泳图谱分析 核酸电泳图谱是指分离纯化的核酸，由于分子量的差异而在电泳中迁移速率不同，形成不同的带型。通过带型异同度的分析可确定生物体间的遗传关系。质粒图谱分析和RNA图谱分析都是电泳图谱分析。 1．质粒图谱分析 质粒是细菌细胞内能自主复制的染色体外的DNA，它是耐药性、毒力因子等特殊遗传特性的载体。多数细菌往往含有大小和数量不等的质粒，具有相对稳定性，因此质粒图谱分析是细菌分型和流行病学的重要工具，具有诊断价值。 该法简便、特异、快速、可靠，缺点是对一些无质粒或质粒不稳定的菌株，以及质粒分子量相同而核苷酸序列不同的菌株无分辨能力。 2．RNA电泳图谱分析 常用的是RNA病毒图谱分析，特别是分节段RNA病毒的电泳图谱分析。 根据不同RNA片段的分子量差异，在PAGE电泳中迁移的速率有所不同，染色后显示出不同的电泳图谱，可将不同的病毒或相同病毒的不同毒株的基因组加以分析比较。 （二）核酸酶切图谱分析 染色体DNA、质粒DNA或RNA经反转录而形成的cDNA，经限制性内切酶切割后产生大小不同的片段，经琼脂糖电泳后可形成不同的带型，即核酸酶切图谱，又称DNA指纹图谱。 用相同的限制性内切酶消化的DNA所产生片段的异同程度，直接反应生物体间的遗传关系。用不同的限制性内切酶消化DNA可分析基因间的连锁关系。本法可用于比较不同病原体基因组的差异，了解它们之间的遗传关系。 限制性酶切片段长度多态分析（RFLP）是核酸酶切图谱分析的延伸，它在一些细菌分子流行病学研究中显示出重要价值，因为细菌染色体DNA限制性酶切片段长度多态性是细菌基因特征的重要指标。RFLP与核酸杂交技术联合使用则结果更容易判断和解释。 （三）寡核苷酸指纹图谱分析 将纯化的RNA经一种特殊的RNA酶（通常为T1酶）消化后，产生许多理化特性和大小不同的寡核苷酸片段，经聚丙烯酰胺凝胶双相电泳分离后进行放射自显影，形成一类似指纹的图谱，即寡核苷酸指纹图谱。 该法在RNA病毒的研究中得到了广泛应用，如基因组遗传多样性研究，同一病毒不同毒株的地理分布、历史演变和宿主类群关系的研究，野毒株与疫苗株的比较等。 三、核酸探针 用放射性同位素、地高辛或生物素等标记核酸分子或其片段的一条链作为核酸探针，与处理样本中存在的互补链结合为双链，这个反应就称为核酸杂交或分子杂交。核酸杂交可分为DNA-DNA杂交，DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交。 根据方法不同，核酸杂交又可分为原位杂交和转印杂交。在转印杂交中，检测DNA的称为Southern杂交，检测RNA称为Northern杂交。核酸杂交已广泛用于特定基因的检测和基因转录活性的研究，具有重要的诊断价值。