形态学检测.pptVIP

细菌的形态学检查是细菌检验的重要方法之一。 细菌的形态学检查可用于细菌的分类与鉴定，并为进一步作生化反应、血清学鉴定提供依据。 细菌的形态学检查可迅速了解标本中有无细菌及大致的菌量并可根据其形态、结构和染色性初步确定其种属，对及时治疗疾病有一定参考意义。 细菌的形态学检查还看根据形态特征对少数细菌作出初步诊断，如痰中的抗酸杆菌和脑脊髓液中的脑膜炎奈瑟菌等； 细菌的形态学检查还可验证培养物是否为纯种。 显微镜是由两组会聚透镜组成的光学折射成像系统。把焦距较短、靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜（object lens），而焦距较长，靠近眼睛、成虚像的透镜组称为目镜（ocular lens）。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作第二级放大， 得到最大放大效果的倒立的虚像，位于人眼的明视距离处。 普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。 暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。 相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。 双目显微镜(binocular microscope)的结构是利用一组复合棱镜把透过物镜后的光束分成强度相同的两束而形成两个中间像，分别再由左右目镜放大。来自物镜的光线经棱镜组分光成两束平行光束，进入目镜，双目显微镜必须满足分光后两束光的光程必须相同和两束光的光强度大小一致这两个基本要求。 荧光显微镜 是以紫外线为光源来激发生物标本中的荧光物质，产生能观察到各种颜色荧光的一种光学显微镜。利用它可研究荧光物质在组织和细胞内的分布。为防止紫外线进入物镜，可以采用暗视场照明。 细胞中的某些物质（如叶绿素）经紫外线照射后能发出可见光线，称为荧光。 自发荧光：由细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光。 诱发荧光：一些细胞成分本身经紫外线照射后不发荧光，但用荧光染料（酸性品红、甲基绿、吖叮橙等荧光色素）进行活体染色或固定后切片染色，就能在荧光镜下看见荧光，这种荧光叫诱发荧光。 倒置显微镜(Inverted Microscope)的组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。 暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有档光片，使照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4nm-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 激光扫描共聚焦显微镜是在荧光显微镜成像的基础上装有激光扫描装置，以单色激光作为光源，使样品被激发出荧光，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。 共聚焦显微镜利用激光扫描束经照明孔形成点光源对标本内焦平面上的每一点扫描，由于照明孔与检测孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明孔和检测孔，焦平面以外的点不会在检测孔处成像，这样就得到了标本清晰的光学切面图，克服了普通光镜图像模糊的缺点。 在显微镜载物台上加一个微量步进马达，使载物台上下移动，改变焦平面，不同层次的光切面图像经计算机图像三维重组，就能获得样品的立体结构图像。 抑制图像的模糊，获得清晰的图像 具有更高的轴向分辨率，并可获取连续光学切片 增加侧向分辨率 由于点对点扫描去除了杂散光的影响 细胞的三维重建 细胞定量荧光测定 ?细胞内钙离子、pH值和其它离子的动态分析 ?细胞间通讯和膜的流动性 光镜分辨极限为0.2?m，小于0.2?m的微细结构的光波可产生衍射现象,这种光波经过物体时可绕过物体就象无物体经过一样,因此无法用光镜观察。这就需要一种更大分辫力的仪器来观察比0.2?m更小的物体的微细结构。 电子显微镜由电子光学系统（照明系统、成像系统）、真空系统、供电系统、机械系统和观察显示系统组成。 照明系统主要由电子枪和聚光镜组成。 电子枪是发射电子的照明光源，其作用是形成电子束，并控制电子束的发射，获得一高亮度和高稳定度的照明电子光源。常用的电子枪由常用的是热阴极三极电子枪，它由发夹形钨丝阴极、栅极帽和阳极组成。 聚光镜是把电子枪发射出来的电子会聚而成的交叉点进一步会聚后照射到样品上。 照明系统的作用就是提供一束亮度高、照明孔径角小、平行度好、束流稳定的照明源。 聚光镜用来会聚电子枪射出的电子束，以最小的损失照明样品，调节照明强度、孔径角和束斑大小。一般都采用双聚光镜系统。第一聚光镜是强激磁透镜，束斑缩小率为10～50倍左右，将电子枪第一交叉点束斑缩小为1～5μm；而第二聚光镜是弱激磁透镜，适焦时放大倍数为2倍左右。结果在样品平面上可获得2～10μm的照明电子束斑。 电子