大肠菌群检测方法精进专案.pptVIP

大肠菌群检测方法精进专案 一、专案原由 1、依茶饮料标准（QB2499），微生物指标中大肠菌群≤3MPN/100ml。故所采用大肠菌检测方法至少应能满足其精度要求。 2、国标检测大肠菌群较为普遍的方法为9管法、5管法和全数过滤法，公司目前使用2管法； 3、国标中尚无2管法的读数标准，而且公司现行2管法的判定标准（每ml不得检出）与茶饮料标准（≤3MPN/100ml），在精度上有较大差距，可能存在无法满足法规要求情况 ； 二、专案目的 1、本专案通过对全数过滤法、5管法和目前检验方法(2管法)的试验结果进行对比，验证 2管法与全数过滤法、5管法间检验精度存在的差异性； 2、根据试验结论及实际操作的可行性，确定适合的大肠菌群检验方法； * 因9管法精度（＜30MPN/100ml）无法满足产品要求，故本专案未予考虑。 三、试验方法 1、对比三种检验方法的精度； 2、对比三种检验方法耗用时间； 3、对比三种检验方法所需费用； 四、精度对比4.1 试验步骤 原始样：选择一变质品使用2管法检测 2管法： 1、培养基：MEKER的BGLB培养基； 2、器皿：15ml的螺口试管(见右图)和 10ml(或5ml)移液管。 4.2、试验材料 5管法： 1、培养基：MEKER的BGLB培养基； 2、器皿：30ml带棉花塞试管(见右图)和10ml(或5ml)移液管。 4.2、试验材料 全数过滤法 1、培养基：北京陆桥的远藤氏琼脂(品红亚硫酸钠)培养基； 2、装置：全数过滤装置、培养皿； 4.3、试验样品的配制及说明 原始样制作：取1瓶含大肠菌群的变质样品作为原始含菌样； 各种稀释度样品配制：使用绿茶作为稀释液根据原始含菌样稀释成10-3/10-4/10-5/ 10-6倍数的4组稀释样，每组250ml； 试验样品配制：根据各种稀释度的稀释样测得的含菌量和最终所需样品的含菌量，使用绿茶成品作为稀释液配置需要的样品； 4.4、检测数据 1.1　2管法检测结果： 4.4、检测数据 1.2　5管法检测结果： 4.4、检测数据 1.3　全数过滤法检测结果： 1.4 　2管法/5管法/滤膜法对含菌量＜1个/100ml样品的检出率对比： 2、样品含菌量为＜10个/100ml 2.1　2管法检测结果： 2、样品含菌量为＜10个/100ml 2.2　5管法检测结果： 2、样品含菌量为＜10个/100ml 2.3　全数过滤法检测结果： 2.4 　2管法/5管法/滤膜法对含菌量＜10个/100ml样品的检出率对比： 3、样品含菌量为＜100个/100ml 3.1　2管法检测结果： 3、样品含菌量为＜100个/100ml 3.2　5管法检测结果： 3、样品含菌量为＜100个/100ml 3.3　全数过滤法检测结果： 3.4 　2管法/5管法/全数过滤法对＜100个/100ml含菌量样品的检出率对比： 4.5、三种检验方法对不同菌含量样品的检出率对比 4.6、三种检验方法实验结果精度对比结论 五、三种检验方法所耗时间对比 五、三种检验方法所耗时间对比结论 六、三种检验方法所耗费用对比 六、三种检验方法所耗费用对比 七、三种检验方法可行性评估 从检验精度看，2管法对10/100ml当量级含菌样品检出率为0,不适宜用于茶饮料大肠菌群的检验； 从检验周期与费用看，5管法都大于全数过滤法； 八、结论 九、标准化 将现行的大肠菌群的检测方法由2管法改为全数过滤法； 实验方法根据国标进行，微检标准依据研发标准； 十、后期改善方向 试验接种量增加1倍，滤膜面积减半情况下（与其他检测项目共用一滤膜），验证检测结果的准确性，以期减少滤膜的消耗费用； 附一： 附二：国标的大肠菌群检测方法 5管法 实验步骤： 推测性检验 1、向5支盛有10ml双料乳糖发酵胆盐培养液的试管中分别接种样液10ml。 2、置36±1℃培养箱中培养24小时，观察每根管的产气情况，如果有气体产生，则可以认为推测性检验阳性。 证实性检测 3、自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）管中，置36±1℃培养箱中培养48小时。 4、观察BGB管中的产气情况，如果有气体产生，就可以确定“大肠菌群”阳性，如果没有气体产生，则为“大肠菌群”阴性。 5、记下BGB管里产气的阳性试管数目，查附表可以得出水样中大肠菌群的MPN值 。 6、 MPN值的计算 　　例如：经过检测后，大肠菌群有2根管阳性，从附表查得MPN值为5.1/100ml。 附二：国标的大肠菌群检测方法 全数过滤法 实验步骤: 1、用灭菌的镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将有网格的一面朝上，贴在已灭菌的滤床上，固定好滤器，加入100ml水样，在0.5大气压下抽滤； 2、水样滤完后，取下滤器，用