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【2013考纲解读】
基因工程
(1)基因工程的诞生 I
(2)基因工程的原理及技术 Ⅱ
(3)基因工程的应用 Ⅱ
(4)蛋白质工程 I
克隆技术
(1)植物的组织培养 Ⅱ
(2)动物的细胞培养与体细胞克隆 I
(3)细胞融合与单克隆抗体 Ⅱ
胚胎工程
(1)动物胚胎发育的基本过程与胚胎工程的理论基础 I
(2)胚胎干细胞的移植 I
(3)胚胎工程的应用 Ⅱ
生物技术的安全性和伦理问题
(1)转基因生物的安全性 I
(2)生物武器对人类的威胁 I
(3)生物技术中的伦理问题 I
生态工程(山东考纲不要求)
(1)简述生态工程的原理 Ⅱ
(2)生态工程的实例 I
DNA的粗提取与鉴定
【知识网络构建】
【重点知识整合】
1.基因工程的基本工具
限制酶 DNA连接酶 (运)载体 切割目的基因和载体 拼接DNA片段形成 重组DNA 携带目的基因进入受体细胞 作用部位 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 ------------------ 作用特点 (条件) ①识别特定的核苷酸序列
② ①E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端
②T4 DNA连接酶能连接黏性末端和平(口)末端 ①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制
②有一个或多个限制酶切割位点
③具有特殊的标记基因 2.基因工程的操作步骤
(1) 目的基因的获取:
①从基因文库中获取。
②利用PCR技术扩增。
③用化学方法直接人工合成。
(2) 基因表达载体的构建:
①基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因。
②基因表达载体的构建方法:
(3)将目的基因导入受体细胞:
植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用
方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 感受态细胞法(用Ca2+处理) 受体
细胞 受精卵、体细胞 受精卵 原核细胞 (4) 目的基因的检测与鉴定:
①目的基因插入检测:DNA分子杂交。
②目的基因转录检测:(核酸)分子杂交。
③目的基因翻译检测:抗原—抗体杂交。
④个体生物学水平检测:根据目的基因表达出的性状判断。
二 细胞工程
1.动物细胞培养与植物组织培养的比较
项目 动物细胞培养 植物组织培养 培养前处理 无菌、用胰蛋白酶处理,使组织细胞相互分散开 无菌、离体 培养基成分 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清等 矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素等 培养基状态 液体培养基 固体培养基 项目 动物细胞培养 植物组织培养 过程 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织→原代培养→传代培养→细胞群 离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织根、芽―→植物体 不能 能
举例 大规模生产有重要价值的生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等;皮肤移植;检测有毒物质的毒性等 快速繁殖、培育无病毒植株;生产药物;制造人工种子;培育转基因作物等 2.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合(单克隆抗体的制备) 理论基础(原理) 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 融合前处理 酶解法去除细胞壁(纤维素酶、果胶酶等) 注射特定抗原,免疫小鼠,获取(效应)B淋巴细胞 促融 ①物理法:离心、振动、电激等;②化学法:聚乙二醇(PEG) ①物化法:与植物细胞融合相同;②生物法:灭活的仙台病毒 过程 第一步:原生质体的制备;第二步:原生质体的融合;第三步:杂种细胞的筛选与培养;第四步:杂种植株的诱导与鉴定 第一步:正常小鼠免疫
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