体细胞核移植技术生产转人溶菌酶基因(hLYZ) 牛胚胎的研究.pdfVIP

农业生物技术学报，  年， 第  卷， 第  期， 第  页  2011 19 2 294~301 JournalofAgriculturalBiotechnology,2011,Vol.19,No.2,294~301  研究报告  ALetter  体细胞核移植技术生产转人溶菌酶基因 hL YZ 牛胚胎的研究 ( ) 熊显荣 李文哲 王丽君 王勇胜 苏建民 华松 张涌 *  712100  西北农林科技大学动物医学院， 农业部动物生殖生理与胚胎工程重点实验室， 陕西杨凌，  * zhy1956@263.net  通讯作者，  摘 要 本研究主要探讨经基因修饰和筛选后转基因供体细胞的挑选及处理对牛转人溶菌酶基因克隆胚 胎早期发育的影响。用含人溶菌酶基因(human lysozyme，h L YZ 乳腺特异表达载体 ) pEBH 重组质粒转染高产 荷斯坦牛成纤维细胞，经 G418 筛选后的转基因阳性细胞作为核供体细胞成功构建了转 hL YZ 基因克隆胚 胎。结果发现， 基因转染及筛选过程对转基因重构胚的发育有不利的影响， 囊胚发育率显著降低； 以注核针 内径为参照， 挑选直径为  滋   的转基因阳性细胞作为供体细胞， 重构胚的融合率和囊胚率较其它组差 15~20 m  异显著 分别为  和  ，P ； 生长旺盛期的细胞构建的转基因克隆胚的卵裂率及囊胚发育率显 ( 80.4% 33.8% 0.05) 著高于经血清饥饿和生长接触抑制处理组 P ； 所有的转基因克隆胚在体外发育的各个发育时期都能 ( 0.05) 观察到绿色荧光蛋白的表达， 但表达的强弱在不同个体及相同个体不同发育时期之间存在差异。随机挑选  10 枚囊胚以 PCR 法进行鉴定， 结果全部为阳性转基因胚胎。研究结果表明， 利用体细胞核移植方法可以获 得转 hL YZ 基因的克隆胚胎， 重构胚可成功的发育到囊胚阶段； 挑选生长旺盛期的直径为  滋   的转基 15~20 m  因阳性细胞作为供体细胞可显著提高转基因克隆胚的融合率和囊胚率。 关键词 人溶菌酶， 转基因， 供体细胞， 核移植， 牛  Human Lysozyme Gene (hL YZ) Transgenic Bovine Embryos Produced by  SomaticCellNuclearTransfer  *  XiongXianrong  LiWenzhe  WangLijun  WangYongsheng  Su Jianmin  Hua Song  ZhangYong  Key Laboratory of Animal Reproductive Physiology Embryo Technology, Ministry of Agriculture, College of Veterinary Medicine, Northwest  Agricuture andForestryUniversity,Yangling 712100,China  *Correspondingauthor,zhy1956@