噬菌体抗体库技术的构建及应用研究进展.pdfVIP

标记免疫分析与临床　２０１１年６月第１８卷第３期 ２０７ 噬菌体抗体库技术的构建及应用研究进展 １，２ ２ 潘　阳 ，王露楠 （１．北京协和医学院研究生院，北京 １００７３０；２．卫生部临床检验中心，北京１００７３０） 关键词：噬菌体展示；　噬菌体抗体库；　免疫抗体库；　小分子抗体 中图分类号：Ｑ７８；Ｒ３９２．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００６１７０３（２０１１）０３０２０７０４ 　　噬菌体抗体库（ｐｈａｇｅａｎｔｉｂｏｄｙｌｉｂｒａｒｙ）技术是由噬菌体 编码肽段和噬菌体壳蛋白融合，就可得到以单链可变区片段 展示技术发展而来的一项新型抗体制备技术。噬菌体抗体 （ｓｃＦｖ）的形式，或以抗原结合片段（Ｆａｂ）的形式展示在噬菌 库技术的基础，噬菌体展示技术，发展自上世纪 ８０年代中 体表面的噬菌体抗体文库（ｐｈａｇｅａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ）。经过 ［１］ 期。１９８５年，美国密苏里大学的Ｓｍｉｔｈ 首次证实丝状噬菌 “吸附洗脱富集”过程可从噬菌体抗体库中筛选出特异性抗 体ｆｄ基因组能通过基因工程的手段加以改造。Ｓｍｉｔｈ将 体［７］。 ＥｃｏＲ 内切酶的部分基因片段与ｐ 基因融合，获得的重组 　　除噬菌体外，还有一类文库表达载体———噬菌粒（ｐｈａｇｅ Ⅰ Ⅲ 噬菌体可在体外稳定增生，同时表达产物能被抗ＥｃｏＲ 内切 ｍｉｄ）。以噬菌粒为表达载体，利用ＶＣＳＭ１３等辅助噬菌体提 Ⅰ 酶抗体所识别。随后，Ｐａｒｍｌｅｙ等［２］将已知抗原决定簇与ｐⅢ 供包装需要的结构蛋白，可产生混合表达型噬菌体。与传统 的Ｎ端融合呈现在表面，可被抗体特异性选择，从而提出了 的丝状噬菌体抗体库相比，噬菌粒适合表达大量的可溶性重 通过构建随机肽库以了解抗体识别的抗原决定簇表位的设 组蛋白，因此成为了基因工程抗体表达的理想选择［８］。 ［３］ 床 想。１９９０年ＭａＣａｆｆｅｒｔｙ等 完成了用噬菌体展示技术筛选 　　１．２　噬菌体抗体库的分类 溶菌酶单链抗体的方法，将这一技术推向了广泛应用，也为 　　根据基因来源，可分为两种不同性质的抗体库，即免疫 临 噬菌体展示技术制备抗体库并广泛应用于免疫学研究奠定 抗体库和非免疫抗体库，后者又包括天然库、半合成库和全 了基础。 合成库［９］。 与 　　１　噬菌体抗体库技术 　　免疫抗体库是指采用经过免疫（包括疫苗注射、微生物 　　噬菌体（ｐｈａｇｅ）属ＤＮＡ单链病毒，长约７０００ｂｐ。噬菌体 析 感染、自身免疫疾病、肿瘤等）后的淋巴细胞所构建的抗体 在细菌内滚环复制，被噬菌体感染的细菌不会裂解，但生长 库。由于用于构建这些抗体库的淋巴细胞已在体内经过抗原 分 ５ ６ 速度减慢，同时分泌出大量成熟的噬菌体颗粒。噬菌体基因 选择和亲和力成熟过程，因此从较小库容（１０～１０）就可以 组共编码１１种蛋白，噬菌体展示技术通常选择在信号序列 筛选到特异性强的高亲和力抗体。许多研究组采用免疫文