软骨藻酸间接竞争ELISA 检测方法的研究.pdfVIP

环境化学 第３０卷　 第６期 　 　 　 Ｖｏｌ． ３０，Ｎｏ． ６ ２０１１ 　 　 ６ Ｊｕｎｅ ２０１１ 年 月 ＥＮＶＩＲＯＮＭＥＮＴＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  软骨藻酸间接竞争ＥＬＩＳＡ检测方法的研究  刘元?　 高利利　 程金平　 王　 茜　 王文华 ２００２４０ （上海交通大学环境科学与工程学院，上海， ） 摘　 要　 为研究满足海产品日常分析的免疫检测法，采用自行制备的软骨藻酸多抗隆抗体，建立间接竞争 ＥＬＩＳＡ检测方法，分别摸索了抗原、一抗、二抗的最佳使用浓度及温育温度与时间，并用该方法测定了贝类样 ＤＡ ． １８ ｎｇ ｍＬ－１ ４７．２％ 品中的 含量结果表明，该方法最低检测限约为 · ，贝类样品测定的加标回收率在 — ９４２％之间．ＲＳＤ在１２．３％—１７．０％之间．所购买３种的贝类样品中均无ＤＡ检出． 　 ＥＬＩＳＡ ． 关键词软骨藻酸，间接竞争 ，多克隆抗体 ｄｏｍｏｉｃ ａｃｉｄ ＤＡ ． ＤＡ 软骨藻酸（ ， ）是失去记忆性贝毒的主要成分人类误食被 污染的海产品后可引 ［１］ 起呕吐、腹泻、意识混乱、记忆丧失等症状，严重者可致死．ＤＡ主要由海洋硅藻中的拟菱形藻属产生， 我国海域内目前发现的拟菱形属硅藻有种其中近海的尖刺拟菱形藻在沿海普遍存在尖刺拟菱形藻 ５ ． ［２］ 是是引发赤潮的重要种类，在大连、青岛、黄海长江口、厦门港及南海各港湾都曾引起赤潮虽然迄今． 为止，中国尚未报道过由ＤＡ引发的中毒事件，海域内存在产ＤＡ毒藻的事实与海产品国际贸易交易量 日趋增大的趋势时刻为海产品检疫敲响着警钟． 对于ＤＡ 的分析已经建立了多种方法，包括小白鼠生物检测法、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测、气相 ［］３ 色谱检测、薄层色谱、毛细管电泳检测法、免疫学方法、受体分析法、生物传感器检测等．其中免疫法检 测因其速度较快，特异性高，操作简便，能同时检测大量样品受到欢迎，适合于基层检验单位常规分析． 免疫分析中使用的抗体主要分为单克隆抗体及多克隆抗体两类，但免疫分析中所需单克隆抗体的制备 繁琐，制备设施要求高，本研究尝试用自行制备的多克隆抗体，建立满足日常分析需要的免疫分析法． １　 材料与方法 １．１　 实验材料 ８００ ＤＡＢＳＡ ＤＡ 自行制备的抗软骨藻酸多克隆抗体（效价为 ）和包被抗原 ；软骨藻酸（ ）、牛血清白蛋 白（ＢＳＡ）购自Ｓｉｇｍａ公司；Ｔｗｅｅｎ２０、四甲基联苯胺（ＴＭＢ）购自上海生工生物工程技术有限公司；辣根 过氧化酶标记羊抗兔（ ）购自北京博奥森生物技术有限公司乙腈（色谱纯）购自 公司； ＩｇＧＨＲＰ ． ＴＥＤＩＡ ９６孔Ｆ型硬板酶标板购自上海生工生物工程技术