讲稿2 Western blot实验技巧及常见问题分析.pptVIP

Western blot实验技巧及常见问题分析 Contents WB原理与应用 WB实验流程 WB实验的关键点 WB实验抗体选择 WB常见问题分析 WB实验参照设计 WB原理与应用 WB是基于蛋白质的SDS电泳分离和特异性抗体识别目标蛋白的特性，通过显色/化学发光/荧光等技术，以达到检测目标蛋白的实验方法。 WB已被广泛用于蛋白质的表达、活性分析和鉴定。 Western blot实验流程 Western blot实验流程 一般来说，完成一个WB流程需要1-2天的时间。 WB实验的关键点 电泳分离蛋白质：蛋白抽提，制胶及电泳过程 转膜：膜的选择，转膜确认 封闭：封闭液选择，封闭条件优化 漂洗：漂洗液的配制与选择、漂洗过程 抗体孵育：抗体选择，抗体稀释倍数优化 底物孵育：恰当的发光或显色底物 曝光：曝光时间掌控，X-光片，CCD成像系统 后Western Blot选择：Striping抗体剥离 可见，WB实验过程中的每一步都会影响到最终的结果表现。 WB实验 抗体选择 抗体特别是一抗的选择是WB实验中首先要确认的。抗体选择恰当与否，与WB实验效果密切相关。 选择的原则： 文献或是同行使用原则 产品说明书证实原则 品牌和售后服务保障原则 WB实验 抗体选择 单克隆抗体 VS 多克隆抗体 单克隆抗体 多克隆抗体 抗原表位 单一 多样 来源（ho