化学专业毕业论文 精氨酸激酶（AK）的提取与纯化.docVIP

学号 编号 研究类型 基础研究 分类号 Q51 毕业论文（设计） Bachelor’s Thesis 论文题目 精氨酸激酶（AK）的提取与纯化 作者姓名 指导教师 所在院系 专业名称 完成时间 主要符号对照表 AK 精氨酸激酶E.coli 大肠杆菌 IPTG异丙基硫代-β-D-半乳糖苷Kanamycin 卡拉霉素 CMC CM-Cellulose S-100 SephacrylTM-100 2-mercaptoethanol 巯基乙醇 Glycine 甘氨酸 PMSF 苯甲基磺酰氟 EDTA 乙二胺四乙酸Arg 精氨酸 ADP 二磷酸腺苷 ATP 三磷酸腺苷 h 目 录 1 1 1.1精氨酸激酶（AK） 1 1.2蛋白质的分离与纯化 2 2实验试剂以及实验仪器： 5 2.1实验材料 5 2.2主要实验试剂与仪器 8 3实验方法 9 3.1活化菌种 9 3.2扩大培养 9 3.3 IPTG诱导AK基因的表达 9 3.4 蛋白质提取 9 3.5蛋白质的检测 10 3.6蛋白质的纯化 10 4结果与分析 12 4.1 AK诱导表达电泳图 12 4.2 蛋白质经CMC离子交换的层析谱图和电泳图 13 4.3蛋白质经分子筛S-100交换的层析谱图和电泳图 14 4.4蛋白质经Q－sepharose阳离子交换的层析谱图和电泳图 16 4.5 AK经各步纯化后的SDS电泳图谱 17 5讨论 18 参考文献： 20 精氨酸激酶（AK）的提取与纯化 摘要：精氨酸激酶（ATP：N-精氨酸磷酸转移酶EC2.7.3.3）存在无脊椎动物中，是参与细胞代谢的磷酸激酶。重组有AK基因的Rosetta，在含有50 μg/ml的卡纳霉素的LB培养基中培养。当A600达到0.6-0.8时，用终浓度为0.2 mM的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养3。加裂解液后用超声破壁离心取上清，得到精氨酸激酶粗提液。通过CM-Cellulose阳离子交换层析，SephacrylTM-100凝胶过滤层析，Q-Sepharose阴离子交换层析分离纯化得到电泳纯的精氨酸激酶。 关键词：精氨酸激酶提取与纯化 Extraction and Purification of Arginine KinaseAbstract： Arginine　kinase（ATP：L-arginine phosphotransferase　EC 2.7.3.3），plays an important role in cellular energy metabolism in invertebrate. E. coli Rosetta which contains recombinant AK gene was grown in LB medium containing kanamycin (25 μg/mL). When absorbance at 600 nm value was between 0.6 with 0.8, isopropyl β-D-thiogalactopyranoside was added to 0.2 mM and the incubation was continued an addition 3 h. The cell was broken and centrifugated, then the crude cell extract was harvested. Furthermore it was purified by following three methods in turn: CM-Cellulose positive ion exchange chromatography, SephacrylTM-100gel filtrate chromatography, and Q-Sepharose anion exchange chromatography. A purified AK was found to be homogenous by SDS poly -acrylaminde g