病理学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用.pptVIP

医学 病理学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用 病理教研室 分子病理学基本概念 现代分子生物学 vs 传统病理学 疾病发生过程中 分子事件及其与疾病发生的关系 揭示 根本机制 复习有关的分子生物学概念 (1)核酸的结构与功能 核酸 ---多核苷酸。 核酸由核苷酸组成 核苷酸由碱基、核糖/ 脱氧核糖和磷酸构成 碱基有五种： A 腺嘌呤 T 胸腺嘧啶 U 尿嘧啶 G 鸟嘌呤 C 胞嘧啶 核苷酸连接方式 核酸----DNA （脱氧核糖核酸）和RNA（核 糖核酸） DNA和RNA的差别 从结构上看 DNA ：含脱氧核糖及胸腺嘧啶 ACGT RNA： 含核糖及尿嘧啶 ACGU 从功能上看 DNA ：构成染色体内的基因组、细胞器基因 组，是遗传信息的贮存和 携带者 RNA： 包括mRNA(信使RNA), rRNA(核糖体 RNA), tRNA(转移RNA) ，分别进行 转录、转译的功能 DNA 结构 一级结构 即DNA 分子中脱氧核苷酸的排列顺 序碱基顺序就代表了核苷酸顺序。 又称为核苷酸序列或碱基序列 二级结构 即DNA分子的双螺旋结构 这种双螺旋结构的一个重要特征是：在一定条件下，双链可解开，亦可重新形成双链 三级结构 DNA超螺旋结构 DNA 复制 双链解链 各自为模板合成新的互 补链 DNA 转录 以DNA为模板合成RNA过程 DNA 翻译 蛋白质合成的同义词以遗传密码 破读的手段转变为蛋白质的氨基 酸排列顺序 如 GGC—— 甘氨酸 GTC—— 颉氨酸 遗传信息贮存于DNA，在核内通过转录成mRNA，在胞浆内mRNA作直接模板来指导翻译 (2) 基因 (gene) 基因表达是指基因的转录翻译以及它们的调控 转录在胞核内进行，翻译在胞浆中进行 (3) 染色质 (chromatin)主要成分是DNA 和 蛋白质， 细胞间期,光镜下呈细颗 粒状 染色体 （chromatosome） 主要成分同上， 细胞分 裂期，由染色质浓集而成，呈杆状,有恒定数目 同一物质在不同时期的形态变化 (4) 蛋白质 一级结构 多肽链氨基酸排列顺序 序列改变→ 构型改变 → 功能改变 二级结构 局部/某一段肽链空间位置 三级结构 (三维结构）整条肽链空间位置 四级结构 多条肽链位置 真核生物基因组 单复制顺序（single copy sequence）在整 个DNA分子中只出现一次或少数几次 中等重复顺序 (moderatelyrepetitivesequences) 在DNA分子中重复出现几十到几千次 高重复顺序(highly tepetitive sequence) 在DNA分子中重复几百万次 反转重复顺序(inverted repetitive sequerce) 其特点是一段碱基呈回文结构 回文结构（palindromic structure） 又称发夹结构(hairpin structure) 如： 5’ AAGCTAGCTT3’ 3’ TTCGATCGAA5’ 其中一条单链回折又可形成双链 3’ T T C G A ∣ ∣ ∣ ∣ ∣ 5’A A G C T 内含子与外显子 内含子（intron）或插入顺序 外显子（exon） DNA变性 定义 变性后性质 变性条件 DNA复性（renaturation） 退火 影响复性因素 简单分子快于复杂分子 小分子快于大分子 DNA浓度高快于浓度低 离子强度高（盐浓度高）快于离子强度低 cDNA mRNA的互补拷贝 cD