洋葱伯克霍尔德菌CF66环二肽的分离纯化及抑菌活性研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１２）：４３～４８ 洋葱伯克霍尔德菌ＣＦ６６环二肽的 分离纯化及抑菌活性研究 １，２ ３ １，２ ３ ３ 王艾晶 　权春善 　王建华 　王军华 　范圣第 （１中国科学院大连化学物理研究所　大连　１１６０２３　２中国科学院研究生院　北京　１０００４９） （３大连民族学院生命科学学院　大连　１１６６００） 摘要　植物真菌病害给农业生产带来了巨大损失，因此对高效、低毒、低残留的生物农药的开发 迫在眉睫。洋葱伯克霍尔德菌ＣＦ６６（ＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅｐａｃｉａＣＦ６６）对真菌类病原菌具有强烈的抑 制作用。其发酵液经减压浓缩和乙酸乙酯萃取得到粗提液，粗提液经反复硅胶柱层析和反相高 效液相色谱（ＲＰＨＰＬＣ）多步柱层析，首次分离纯化得到一种环二肽———ｃｙｃｌｏ（ＰｈｅＰｒｏ）（ｃＦＰ）。 利用气质联用（ＧＣＭＳ）系统和ＨＰＬＣ进行定性和定量，结果表明分离纯化物质呈单峰，纯度较高 且经标准曲线算出其浓度约为１５ｍｇ／ｍｌ。ＭＩＣ值的测定结果表明该物质对立枯丝核菌、黄瓜菌 核、玉米弯孢病菌等植物病原菌及冻土毛霉、黄曲霉、米根霉等食品腐败菌均具有较强的抑制作 用。经显微镜观察发现，该物质可使丝状真菌菌丝生长异常，菌丝由光滑细长变得粗糙、弯曲、短 粗且顶端膨大呈泡状。 关键词　洋葱伯克霍尔德菌　环二肽　分离纯化　抑菌性 中图分类号　Ｑ８１９ 　　洋葱伯克霍尔德菌（Ｂ．ｃｅｐａｃｉａ）是一种广泛存在于 农药，在农业生产和环境保护方面有着非常好的应用 水、土壤、植物表面和人体中的革兰氏阴性细菌。２０世 前景。该菌之所以有如此强的抗真菌活性，可能跟自 ［５］ 纪５０年代初，美国的植物病理学家Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒ发现该 身代谢产生的多种活性物质有关，如硝吡咯菌素 、吩 ［１］ ［６］ 菌可以引起洋葱茎腐烂，故称其为洋葱假单胞菌 。 嗪 、嗜铁素、吲哚乙酸、环二肽类等，近年来探索这些 １９９２年Ｙａｂｕｕｃｈｉ等正式将该菌归为一个新属，即伯克 活性物质的生理生化功能已成为研究的热点。 ［２］ 　　 环二肽又被称为 ２，５二酮哌嗪的衍生物 霍尔德菌属 。本实验室成功地分离了具有广谱抗菌 活性的ＣＦ６６菌株，并通过生理生化特性研究和 １６Ｓ （ｄｉｋｅｔｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ，ＤＫＰ），是自然界存在的最简单肽的 ｒＲＮＡ序列分析鉴定其为洋葱伯克霍尔德菌。该菌株 衍生物。该类化合物在人、动物、植物、真菌和细菌中 ［７］ 能够抑制多种植物病原真菌，如草莓蛇病菌、尖孢镰刀 均有发现 。环二肽的种类繁多且功能各异。目前发 ［８］ 菌、半裸镰刀菌、禾谷镰刀菌、菜豆炭疽病菌、白羽纹病 现许多环二肽具有较强的生理活性，如抑菌性 、抗真 菌等，尤其对尖孢镰刀菌和白色念珠菌具有很强的拮 菌性、抗肿瘤性［９］、调节激素及能量代谢、介导细胞间 ［１０］ 抗作用，不仅如此，其产生的抗菌活性物质还能够抑制 通讯 ，抗健忘、诱导生物发光和色素产生等，因此引 多种食品腐败真菌，如毛霉、黑曲霉、黄曲霉、串珠镰刀 起了科研工作者的广泛兴趣。 ［３，４］