污水中分离噬菌体的研究.docVIP

污水中肠道杆菌噬菌体的分离及其生物学活性研究 郭海萍①，陈振辉②，黄艳梅②，赖金甜②，吴丽娜② 广州医学院病原生物学教研室，②广州医学院检验系03级） 摘要 目的：通过肠道杆菌噬菌体特性的观察，为了解噬菌体生物学活性及其吸附特异性，探讨噬菌体溶菌机理及治疗性噬菌体的临床应用奠定研究基础。方法：利用标准菌株从污水中分离特异性噬菌体，从中探讨噬菌体的生物学特性，纯化并保存。结果：在污水中分离得到大肠杆菌ACTT25922的噬菌体和大肠杆菌ACTT35218的噬菌体。结论：噬菌体普遍存在于自然界中，且其生物特性于普通病毒相似，在自然中很容易被灭活和变异。 关键词：污水；分离；噬菌体； Abstract Objective:, We get across to observe the characteristic of enteric bacilli phage, In order to understand the biologic activation and the specific adsorbent of enteric bacilli phage,at the same time explore bacteriolysis mechanism of the phage and Phage therapy . All of that help to lay a foundation for future. Method： We use standard germs to separate differential phages from the dirty water, then we discuss biologic identity of the phage, at last we purify and save them. Results: We and discover two phages of E.coli ACTT25922 and E.coli ACTT35218 from the dirty water. Conclusion: Phage exists in nature prevalence, and its biologic identity is similar to the common virus, the mean is that it’s easy to be destroyed and occur aberrance in nature. Key words : dirty water separate phage 中图分类号： 基金项目；广州医学院学生学术科技项目基金(No.05108) 作者简介：郭海萍(1971-)，女，讲师，广州医学院病原生物学教研室，主要研究方向为抗感染免疫。E-mail:guo_hp@ 噬菌体是一类细菌依赖性的病毒，所以又称为细菌病毒。烈性噬菌体（Virulent phage）感染敏感细菌后，可在其细胞内快速增殖，并使之裂解，故又称毒性噬菌体。噬菌体是宿主依赖性的，会随着细菌宿主的消失而死亡，不会残留在动物产品中。因此,噬菌体以其特有的自然特征有望成为较好的抗菌药。噬菌体治疗是利用噬菌体溶解细胞的作用而用于治疗人和动物的病原细菌的临床感染。早在20世纪初，噬菌体治疗就取得过积极的治疗效果。目前针对传统抗生素治疗动物细菌感染时易产生残留及细菌耐药性等缺点，噬菌体治疗更表现出许多突出的优越性[1,2]。本实验主要是从污水中分离特异性噬菌体，并对其生物学活性进行研究，为以后的研究及临床应用打下基础。 1、材料和方法[3]： 1.1、材料 主要菌种：大肠杆菌（ACTT25922）、大肠杆菌（ACTT35218）、铜绿假单胞菌（ACTT27853）、福氏痢疾志贺菌、宋内氏痢疾志贺菌。 主要试剂：琼脂、肉汤培养基、半固体琼脂，按常规方法制备。 主要器材：22um滤菌器、台式离心机、恒温箱、摇床、吸管、试管、普通平板（9cm）、微量加样器（10-1000ul） 1.2、方法： 1.2.1准备工作： 、高压灭菌：对所有玻璃仪器、对琼脂、肉汤培养基、半固体琼脂进行115℃高压灭菌。 、收集污水：收集校园生活污水200ml。 、增殖标准菌株：把标准菌株接种到营养肉汤中（约4ml），放进摇床37℃振荡培养10小时，后备用。 1.2.2、噬菌体的分离： 、取营养肉汤培养基20ml，加入标准菌对数期菌液2ml（上述标准菌株混合液）。 、把固体CaCl2加入上部所得菌液中，使菌液中的CaCl2的浓度为1mmol/L。 、过滤污水：取污水50ml，用0.22um滤菌器去除污水中的细菌，并把滤液直接虑进上述菌液中。如欲富集，可先在污水中加入5ml混合菌培养物，在37℃培养过夜，再