黄孢原毛平革菌发酵产酶策略优化.pdf

摘 要 在过去的二十多年里，用木质素酶处理难降解有机物受到了广泛的关注和研 究。由于酶处理法具有简单、安全、非特异性等优点，故在环境领域的应用和研 究得到了迅速发展。但是，由于木质素酶的产生过程非常敏感和复杂，尚未得到 促进木质素酶高产和保持其稳定性的最优策略，并且该原因导致木质素酶尚未在 工程中得到广泛应用。 本文重点研究了黄孢原毛平革菌发酵产木质素酶的过程中，进行碳源和氮源 补料、蛋白酶抑制剂补料、过氧化氢催化剂补料对木质素酶产量的影响，及蛋白 酶和过氧化氢对木质素酶离体稳定性的影响，目标是为获得木质素酶的高产量发 酵提供技术依据。得到的主要成果总结如下。 5 (1) 孢子接种液终浓度为 10 个/mL 时，LiP和MnP产量最大。 (2) 灭菌摇瓶悬浮培养条件下，最适碳源补料时间为发酵后 24h ，最适浓度 为 2g/L(不计体系原碳源浓度) ，酶活稳定性增强。 (3) 初级代谢和次级代谢蛋白酶都能使 LiP 活性降低，在发酵过程中补入蛋 白酶抑制剂可促进LiP 产生。其中培养第 1d 和第 4d 补入 EDTA ，LiP 峰值分别 提高 13.7 倍和 16.7 倍。 (4) 初级代谢蛋白酶能促进MnP 的产生，次级代谢蛋白酶抑制MnP 的产生。 在发酵第 1d补入初级代谢蛋白酶，MnP提前 2d产生；补入蛋白酶抑制剂，MnP 产量下降。第 4d补蛋白酶抑制剂PMSF和Pepstatin A后，MnP峰值分别提高 1.4 倍和 1.9 倍。发酵过程中第 1d和第 4d补入CuSO ，LiP峰值分别提高了 2.2 和 4.3 4 倍；同样时间补入KI后，MnP酶活峰值提前 2d 出现。 (5) 过氧化氢导致 LiP 和 MnP 的失活非常迅速，但其作用与酶液成分有关。 关键词：木质素酶；黄孢原毛平革菌；营养物补料；蛋白酶；过氧化氢 1 Abstract In the last twenty years, the research of persistent organic pollutants with lignin degrading enzymes has got worldwide attention. As the enzymes treatment method has many advantages such as simple, safe and non-specific, the application and research in the field of environmental protection is developed rapidly. However, because the producing progress of lignin degrading enzymes is sensitivity and complexity, the best method of promoting the output and keeping the stability of lignin degrading enzymes has not been found out, and as a result, the lignin degrading enzymes has not been applied widly in the engineer. This paper pay more attention to the effection of fed-batch of the carbon source and nitrogen source, the inhibi