BHV-1 gG-tk-GM-CSF+重组病毒的构建及其免疫效果的评价.pdfVIP

牛病 2013·17 COW DISEASE COLUMN 专栏 - - + BHV-1 gG /tk /GM-CSF 重组病毒的构建 《 中 及其免疫效果的评价 1，3 1，2 1，2 1，2 1，3 1，2 1，2 国 纪素坤 ，邓明亮 ，费文涛 ，胡长敏 ，陈颖钰 ，郭爱珍 ，陈焕春 （1.农业微生物学国家重点实验室，华中农业大学，武汉  430070；2.华中农业大学动物医学院， 奶 武汉  430070；3.华中农业大学动物科技学院，武汉  430070） 牛 中图分类号：S823.3 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2013）17-0003-06 》 摘 要：通过引入免疫增强因子GM-CSF，提高重组病毒的免疫原性。将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中， 2 构建GM-CSF基因表达盒；将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载 0 - - + 1 3 体中，得到转移载体pTK-GM-CSF。将亲本病毒BHV-1 gG /TK /EGFP 基因组与转移载体pTK-GM-CSF采 - - + 年 用磷酸钙法共转染MDBK细胞，得到重组病毒BHV-1 gG /TK /GM-CSF 。并对重组病毒的生物学特性和对 第 日本大耳白兔的免疫原性进行了评价。利用PCR和RT-PCR证实GM-CSF基因表达盒已正确插入重组病毒的 tk基因位置，并具有转录活性。亲本株和重组株的空斑形态、空斑直径大小无明显差异；两者病毒滴度无明显 变化，生长曲线相似；体外遗传稳定性良好。兔体试验表明，在免疫早期重组毒株能产生较亲本株更高水平的 1 7 期 IFN-β（P0.05）。但中和抗体水平、攻毒后的临床症状及病毒排毒时间等各项指标检测表明，亲本株和重组 毒株之间无明显差异。在免疫早期重组株刺激机体产生的IFN-β高于亲本株，具有一定的应用前景。 关键词：牛传染性鼻气管炎；牛疱疹病毒Ⅰ型；GM-CSF；重组病毒；基因工程疫苗 · 牛 牛传染性鼻气管炎（infectious bovine rhinotrache