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微生物学通报 MAY 20, 2009, 36(5): 652~657
Microbiology © 2009 by Institute of Microbiology, CAS
tongbao@
研究报告
脱氮硫杆菌特异引物/探针的设计和评价
1* 2 2 2 1
赵阳国 王爱杰 万春黎 任南琪 白 洁
(1. 中国海洋大学 环境科学与工程学院 山东 青岛 266100)
(2. 哈尔滨工业大学 市政环境工程学院 黑龙江 哈尔滨 150090)
摘 要: 自脱氮硫杆菌(Thiobacillus denitrificans)16S rRNA 基因V3 可变区中发现一条27 bp 的特
异序列, 以该序列为反向引物, 对高效同步脱硫反硝化系统污泥 DNA 进行了温度梯度 PCR 扩增
和基因文库构建, 结果证实了该引物的高度专一性。应用该探针在去离子甲酰胺和NaCl 的浓度分
别为35%和 100 mmol/L, 杂交/ 洗脱温度为48°C 条件下对污泥样品杂交得到较好的阳性结果, 软
件分析表明脱氮硫杆菌在污泥中约占 15%。脱氮硫杆菌专一性引物/探针的提出, 将为不同生态环
境中该种微生物的时空分布、结构动态以及实时定量等研究提供分子生物学工具。
关键词: 脱氮硫杆菌, 16S rRNA, 引物, FISH, 活性污泥
Design and Assessment of Species-specific Primer and
Probe for Thiobacillus denitrificans
ZHAO Yang-Guo1* WANG Ai-Jie2 WAN Chun-Li2 REN Nan-Qi2 BAI Jie1
(1. College of Environmental Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao, Shandong 266100, China)
(2. School of Municipal and Environmental Engineering, Harbin Institute of Technology, Harbin, Heilongjiang 150090, China)
Abstract: A species-specific oligonucleotide sequence was screened from the third variable domain of 16S
rRNA gene of Thiobacillus denitrificans. It confirmed that the sequence had the high speciality by amplify-
ing the activated sludge DNA in high simultaneous biological removal of sulfate and nitrate process and fur-
ther determining the sequences of 16S rRNA gene clone library. The Cy3-labeled species-specific probe hy-
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