口蹄疫病毒O、A、AsiaⅠ型定型诊断胶体金免疫层析方法的.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(11):3801-3808 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.11.048 口蹄疫病毒O、A、Asia Ⅰ型定型诊断胶体金 免疫层析方法的建立 蒋 韬，梁 仲，陈 涓，何继军，吕 律，马维民，刘在新，刘湘涛 （中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 ） 摘要：【目的】建立一种从田间样品中快速、灵敏、简便检测O、A、Asia I型口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫 层析方法（GICA）。【方法】采用柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒，标记纯化的标准株O、A、Asia I型口蹄疫抗体。 将纯化的口蹄疫流行株O/China99,A/AF72 and AsiaⅠ/China05抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上， 作为检测带与质控带。经试验条件优化，组装形成胶体金定型诊断试剂盒。【结果】本试验研制的口蹄疫定型试剂 盒具有良好的灵敏度，可检测到 7.8×104 LD50 （1﹕128 倍稀释乳鼠毒）的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行 3 次重复检测结果完全相同，说明其有较好的重复性；特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原，如 猪水疱病抗原（SVD）、水泡性口炎（VS）、水泡性疹（VES）等病毒时无交叉反应；试剂盒对206 份已知血清型田 间及实验室样品的符合率试验，O、A、AsiaⅠ型和阴性样本的符合率分别为 92.45 %、91.66%、92.75%、100%定 型准确率94.58%。试剂盒在4℃下可保存6 个月。【结论】本试验研发的口蹄疫病毒胶体金定型诊断试剂盒是一种 快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法，对基层现场具有广泛应用价值。 关键词：O、A、Asia I型口蹄疫病毒；胶体金；免疫层析法 Development of a Rapid Gold Immunochromatographic Strip Test for the Diagnosis of Foot-and-Mouth Disease Virus O, A and Asia Ⅰ Type JIANG Tao, LIANG Zhong, CHEN Juan, HE Ji-jun, LÜ Lü, MA Wei-min, LIU Zai-xin, LIU Xiang-tao (Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture/State Key Laboratory of Veterinary Etiol ogical Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agrcultrual Sciences, Lanzhou 730046) Abstract: 【Objective 】 To develop a sensitive, rapid and simple gold immunochromatography assay (GICA) for determination of foot-and-mouth disease virus (FMDV) O, A, Asia I type from the field samples. 【Method 】 The purified anti-FMDV O, A, Asia I type Guinea pig antibody were coupled with the colloidal gold, and it was obtained by reducing the gold chloride with sodium citrate. The purified anti-FMDV strain O/China99, A/AF72 and Asia Ⅰ/China05 rabbit anti