混合抗体的亲和色谱分离策略.pdfVIP

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2017-09-15 发布于重庆
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混合抗体的亲和色谱分离策略.pdf

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２０１３年１０月Ｖｏｌ.３１Ｎｏ.１０Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１３ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ９７４ ~９７９研究论文ＤＯＩ:１０.３７２４/ ＳＰ.Ｊ.１１２３.２０１３.０３０２６混合抗体的亲和色谱分离策略１ꎬ２２∗ ２２ꎬ３周月芳 ꎬ　张　焱 ꎬ　罗　坚 ꎬ　康丽梅 ꎬ　２２１∗ ２∗ 陈　毅 ꎬ　石　红 ꎬ　孟庆雄 ꎬ　苏志国 (１. 昆明理工大学生命科学与技术学院ꎬ云南昆明６５０２２４ꎻ２. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室ꎬ北京１００１９０ꎻ３. 四川大学华西药学院ꎬ四川成都６１００４１) 摘要:乳腺生物反应器可以高效表达重组人单克隆抗体ꎬ但是目标产品与乳液原料中的牛抗体性质、结构非常类似ꎬ分离难度很大ꎮ 本文对牛抗体和重组人抗体的种属差异进行了分析ꎬ并在此基础上制定了新型分离策略ꎬ采取ＰｒｏｔｅｉｎＡ亲和色谱和免疫亲和色谱来解决混合抗体的分离问题ꎬ并讨论了色谱洗脱模式对分离效果的影响ꎮ 结果表明ꎬＰｒｏｔｅｉｎＡ亲和色谱结合梯度洗脱可以有效地纯化得到混合抗体ꎬ但是难以彻底分离重组人抗体和牛抗体ꎻ相比之下ꎬ使用ＰｒｏｔｅｉｎＡ亲和色谱结合置换色谱模式可以更加高效地分离混合抗体ꎬ最终可以得到纯度高达９５％以上的重组人抗体ꎬ回收率可达９５％以上ꎮ 免疫亲和色谱同样可以有效地分离纯化重组单克隆抗体ꎬ且其通用性更强ꎬ可以应用于任何动物乳腺表达重组人抗体的分离纯化中ꎮ 关键词:ＰｒｏｔｅｉｎＡ亲和色谱ꎻ免疫亲和色谱ꎻ重组人抗体ꎻ牛抗体ꎻ乳腺生物反应器中图分类号:Ｏ６５８　　　文献标识码:Ａ　　　文章编号:１０００￣８７１３(２０１３)１０￣０９７４￣０６Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｙｏｆａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｆｏｒｍｉｘｅｄａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１ꎬ２２∗ ２２ꎬ３ＺＨＯＵＹｕｅｆａｎｇ ꎬＺＨＡＮＧＹａｎ ꎬＬＵＯＪｉａｎ ꎬＫＡＮＧＬｉｍｅｉ ꎬ ２２１∗ ２∗ ＣＨＥＮＹｉ ꎬＳＨＩＨｏｎｇ ꎬＭＥＮＧＱｉｎｇｘｉｏｎｇ ꎬＳＵＺｈｉｇｕｏ (１. ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＫｕｎｍｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２２４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ２. ＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬ ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＢｅｉｊｉｎｇ１００１９０ꎬＣｈｉｎａꎻ