高效阴离子交换色谱法分析杜氏盐藻多糖的单糖组成.pdfVIP

第十一届全国离子色谱学术报告会论文集 浙江杭州.2006.11.28-30 257 高效阴离子交换色谱法分析杜氏盐藻多糖的单糖组成 1 2 3 1 1 旻3 4 戴军 梁立娜 尹鸿萍 陈尚卫 汤坚 *王 刘艳芳 1(江南大学分析测试中心,无锡214036) 2（中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京100085） 3（中国药科大学生命科学学院,南京210009) 4（上海农业科学院食用菌研宄所，上海201106） 摘要：选用CarboPac PA20 分析柱(3mmi.d.×150mm), 以.H O-250 mmol/L NaOH-1 mol/L NaAc 2 为流动相建立了三元梯度洗脱分离、积分脉冲安培检测多糖中常见的 8 种中性单糖和 2 种糖 醛酸的高效阴离子交换色谱分析方法；利用离子交换色谱柱(DEAE Sepharose CL6B fast flow,3.5cm×30cm ）和凝胶过滤色谱柱(Sepharose CL6B, 2.6cm×100cm)从提取出β-胡萝卜素的 杜氏盐藻残渣中分离出PD1 、PD2 、PD3 、PD4a和PD4b共 5 个多糖级分，选用适当的条件水 解后,利用高效阴离子交换色谱法测定了各多糖级分的单糖组成。其中具有显著生物活性的 多糖级分PD4a 中主要含有半乳糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、盐藻糖及鼠李糖六种中性糖， 还含有少量糖醛酸；PD4b 中主要含有核糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及木糖五种中性糖， 不含糖醛酸。该结果与PMP柱前衍生化反相高效液相色谱法测定的单糖摩尔比基本一致。10 种单糖的离子色谱法的检出限为 0.76~2.92nmol/L （以3 倍信噪比计），峰面积相对标淮偏差 RSD为 0.72~3.25% 。 关键词：高效阴离子交换色谱法，杜氏盐藻，多糖，单糖 杜氏盐藻（Duanaliella Salina ）是绿藻类浮游生物，主要用于提取β-胡萝卜素。其提取 后的藻渣中存在含量丰富的多糖类物质，由于具有免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活 性，其研究开发具有重要意义[1,2] 。而盐藻多糖的单糖组成的分析是其性质、结构及构效关 系研究的一项基本且重要的内容。由于单糖极性较强，结构相近，且缺乏光学活性，故为了 改善其分离选择性和提高检测灵敏度，人们常将多糖水解产生的单糖进行衍生后再利用气相 色谱或高效液相色谱分离和检测[3-5]，其衍生化操作较烦琐费时。而高效阴离子交换色谱法 [6](HPAEC)可在碱性流动相条件下用阴离子交换柱将糖分离，再用脉冲安培检测器直接检 测，操作简便，检测限低，且准确度和精密度均较高。文献中用HPAEC 同时分析单糖的种 类较少，且大多为等强度洗脱，本文针对多糖中可能含有的单糖种类较多这一特点，用 HPAEC柱(CarboPac PA20 3mmi.d.×150mm) 建立了H2O-250 mmol/L NaOH-1 mol/L NaAc三 元梯度洗脱分离、积分脉冲安培检测器检测多糖中常见的 8 种中性单糖和 2 种糖醛酸的分析 方法；并利用离子交换色谱法和凝胶过滤色谱法从杜氏盐藻中分离出 5 个多糖级分，选用适 当的条件水解,再利用HPAEC测定了各级分的单糖组成；同时用PMP柱前衍生化反相高效液 相色谱法[7,8]对其结果进行了验证与比较。 1. 实验部分 1.1 仪器与试剂 ICS3000 离子色谱仪(美国 Dionex 公司) 。HH-S 数显恒温水浴锅；HL-2S 恒流泵(上海沪 西分析仪器厂有限公司) ；ＴＨ-1000 梯度混合器(上海沪西分析仪器有限公司) ；R20 旋转蒸 发器(无锡市星海生化设备有限公司) ；HD-3 紫外检测器（上海沪西分析仪器厂有限公司）； BSZ-1000 自动部分收集器（上海沪西分析仪器有限公司）。玻璃离子交换柱（3.5cm×30cm， 上海沪西分析仪器厂有限公司；填装