DFRKN一1碱性磷酸酶的纯化研究.pdfVIP

广东农业科学 2011年第 2期 142 DFRKN一1碱性磷酸酶的纯化研究 马爱瑛 ，张靠稳 ，贝盏临，邓 蕾，牟 毅 (北方 民族大学生物科学与工程学 院，宁夏 银川 750021) 摘 要：以根结线虫天敌 1号分离物为提取碱性磷酸酶的材料 ，菌体经液氮研磨破碎后，用正丁醇抽提 ，硫酸铵分级沉淀分离， 透析获得酶 的粗提取液 。再经过 DEAE一52离子交换和 SephadexG一150分子筛两步层析得到纯化倍数为 27．17、比活力达 10514 U／mg的碱性磷酸酶。 关键词：根结线虫天敌菌 1号分离物：碱性磷酸酶：分离纯化 中图分类号：S181 文献标识码：A 文章编号 ：1004—874X(2011)02—0142—02 PurificationofalkalinephosphataseofDFRKN——1 MA Ai—ying，ZHANG Kao—wen，BEIZhan—lin，DENG Lei，MOUYi (Collgeof，J ScienceandEngineering，NorthUniversityforNationalities，Yinchuan 750021，China) Abstract：Thestudyaimedtoisolatethealkalinephosphatasefrom destroyingfungiofroot—knotnematode-1 (DFRKN-1)．Ithad beenisolatedbymeansofthefollowingprocedures：n-butanolextractionandammonium sufatefraetionation，thepartiallypurifiedenzyme wasgained by meansofion-exchangechromatographyonDEAE-52，and gelfiltration chromatographyon Sephadex G-150 ．The purificationattainedto27．17foldsandthespecificactivitywas10514U／mg． Keywords：DFRKN一1；alkalinephophatase；puricati0n 根结线虫 (Meloidogynespp．)是严重制约世界农业生 1．1．1 试验材料 DFRKN一1由北方 民族大学生物科学与 产发展的一类植物寄生线虫Ⅲ，一般采用化学杀线药剂对 工程学院保存。 根结线虫进行防治，虽然有较 明显的效果 ，但化学药剂的 1．1．2 试验试剂 对硝基苯磷酸二钠 (PNPP)、DEAE一52、 长期使用带来 了一系列的环境污染问题 ，如土壤农药残 SephadexG一150、牛血清 白蛋 白购 自北京拜尔迪 ；玉米粉购 留的增大 、地下水源 的污染、病虫抗药性 的增强等 。因 自超市 ；硫酸铵 、葡萄糖 、盐酸 、Tris试剂 、正丁醇 、氯化钠 此 ，符合现代农业可持续发展战略理念的生物防治方法 均为国产分析纯 成为根结线虫治理 的首选措施 张靠稳从宁夏温室黄瓜 1．2 试验方法 根 结线虫上分离得到一株根 结线虫天敌 l号分离物 1．2．1 碱性磷酸酶粗酶的提取 参照张靠稳等3[1的方法略 (Destroying fungiofroot—knotnematode一1，DFRKN—1)， 有改动：将 DFRKN一1按 l％接种到 150mL玉米粉液体培 此分离物对根结线虫有较强的致病作用 ，该菌能够从根