2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的制备及对手抄片抗菌性研究.docVIP

2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的制备及对手抄片抗菌性研究 刘鹏涛*，苗红，刘忠 天津科技大学 天津市制浆造纸重点实验室，天津 300457 关键词：2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖 抗菌性 抑菌环 壳聚糖是甲壳素脱乙酰化产物，表现出多种生物活性和功能，包括止血、抗微生物、生物降解性以及与金属离子有强的亲和性，因此在食品、化工、环保等领域都有很广泛的应用[1]。纸张和纸制品在工业和生活中应用广泛，但是在其生产和使用过程中容易粘附细菌和霉菌[2,3]。因此，抗菌纸张的制备显得尤为重要；利用天然可再生、无生物毒性原料制备抗菌剂也是当前研究的热点。 本研究通过对壳聚糖进行化学改性，制备了2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(HTCC)，表征了其结构，考察了HTCC溶液浓度对大肠杆菌、金葡球菌和黑曲霉的抗菌效果HTCC的手抄片的抗菌性能。 壳聚糖与醚化剂缩水甘油三甲基氯化铵反应，采用直接在壳聚糖的氨基上接的方法制得壳聚糖季铵盐。三口烧瓶中2.1g壳聚糖2g醚化剂60mL异丙醇和40mL水85°C充分搅拌7.9g醚化剂85°C反应8后，丙酮洗涤得到壳聚糖季铵盐HTC。其反应方程式如所示。HTCC的取代度在1.0-1.3之间。 Scheme 1 The synthesis route of HTCC Figure 1是壳聚糖季铵盐红外谱图。季铵盐1600 cm-1吸收峰消失（酰胺基团中-NH2伸缩振动吸收峰），出现了1488 cm–1（–CH3的C-H弯曲振动吸收峰），表明壳聚糖分子中亲核中心-NH2上的H已经被-CH2CH(OH)CH2N+(CH3)3Cl-部分取代，生成了。同时在2800-2900 cm–1之间–CH3–CH2伸缩振动收峰变得复杂，说明有多种新的烷基基团的引入。是季铵盐的核磁谱图，其中，δ=3.20ppm处出现季铵盐支链三个甲基上的H吸收峰。δ=2.76、4.3、3.39ppm处出现的吸收峰分别对应于季铵盐支链上的C1C2、C3上的H的吸收峰。 Figure 1 FTIR spectra of chitosan(a) Figure 2 1H NMR spectrum of HTCC and HTCC (b) 将高温蒸汽灭菌后的固体培养基倒入培养皿，重新冷却凝固。向培养皿中加入一定量的HTCC水溶液和浓度为106-107CFU/mL的菌悬液，用涂布棒分散均匀，置于生化培养箱，细菌37°C培养24h，霉菌28°C培养48h后，观察微生物的生长情况。抑菌率，其中N1和N2分别代表加入HTCC样品与参照样品(HTCC水溶液浓度为0的样品)培养后，微生物的菌落数[5]。 Table 1 Effect of HTCC concentrations on antimicrobial activity Conc. of HTCCa /% S. aureus E. coli A. niger N η (%) N η (%) N η (%) 0 5.4×107 - 4.5×107 - 4.4×106 - 0.005 4.9×107 9.3 3.9×107 13.3 3.8×106 13.6 0.010 3.7×107 31.5 3.3×107 26.7 3.6×106 18.2 0.025 6.4×106 88.1 8.7×106 80.7 3.5×106 20.5 0.050 1.7×106 96.8 4.3×106 90.4 3.2×106 27.2 0.100 0 100 2.0×106 95.6 2.0×106 54.5 a HTCC with quaternization degree of 1.23. Table 1中列出了HTCC水溶液的浓度对于HTCC抗菌性能的影响。随着HTC浓度的提高，对种的抑菌率都是相应增强，这说明HTC的抑菌效果非常明显。随着浓度的提高，更多的HTC可以包覆在表面，形成一层致密膜，切断其与外界的营养联系，使菌种的细胞壁发生溶融，起到抑菌的效果。当HTC浓度在0.25%以上时，大肠杆菌和金葡球菌的抑制效果都达到0%以上；当浓度为%时，对两种菌的抑菌率达到了9%左右。HTC对黑曲霉的抑制率不高，浓度0.025%时，没有显著抑菌效果到%时也仅维持在%左右。环境pH值、温度以及热处理对抗菌效果HTCC粉末，用Rapid Kothen抄片器抄片。采用抑菌圈实验考察手抄片的抗菌性能。将直径为10mm的手抄片样品置于涂布菌悬液的培养基平板上，在标准条件下培养，准确记录抑菌圈的宽度[5]。 Table 2 The antimicrobial activity of sheets Conc. of HTCC a/ % Diameters of inhibition zones /mm S. aure