维生素的检测方案—HPLC法.pdfVIP

Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园 7号楼 1、3层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn   维生素的检测方案—HPLC法  天美（中国）科学仪器有限公司  甄蕊  维生素是维持生物体正常机能的必不可少的一大类有机物质，虽然机体对这类物质 的需求量很小，但却十分重要。维生素是个庞大的家族，目前所知的维生素就有几十种， 大致可分为脂溶性和水溶性两大类。维生素常被作为营养强化食品的添加因子，广泛存 在于谷类、果蔬、肉禽和蛋类等加工食品中，因此，维生素的检测对食品、饲料和医药 领域都有非常重要的意义。 1、脂溶性维生素检测方案  脂溶性维生素包括维生素A、维生素D和维生素E，由于这几种维生素在外界环境 中不稳定,很容易受光、氧等影响而维生素被氧化破坏,影响因素较多,因此维生素A、D 和E的同时测定目前是检验技术的难点。 采用日立高效液相色谱仪配二极管阵列（DAD）检测器，根据GB/T5009.82-2003 和GB/T5413.9-1997测定了食品中的维生素A、维生素D以及α、β、γ、δ四种维生 素E的衍生物。选择日立的DAD检测，7种混标可以同时检测，根据标准要求提取不 同波长下的色谱图，且日立的DAD检测器的灵敏度可以和UV检测器达到一个数量级 别，保证了维生素的痕量检测。 1.1色谱条件 柱：HitachiLaChromC18(5μm)4.6mmI.D.x250mm 柱温：30℃ 流速：1.5mL/min 检测波长：200-350nm，300nm，265nm 进样量：20μL 流动相：CH OH:H O=98:2 3 2 1.2样品前处理  皂化 准确称取5g样品于皂化瓶中，加入30mL无水乙醇，充分混匀后加50mL氢氧化 Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园 7号楼 1、3层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 钾溶液，在蒸汽浴上连续回流30min后，立刻冷却到室温。  提取 将皂化液转入500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲洗皂化瓶，洗涤液并入 分液漏斗中。加入100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1min。在振 摇过程中，注意释放瓶内压力。静置分层，弃去水层。  洗涤 重复上述萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性。  浓缩 通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近干（绝不 允许蒸干）后，除去石油醚，加入乙醇转移至10mL容量瓶中，用乙醇定容。 1.3实验结果 VA=25μg/mL,VD =0.2785μg/mL,VD =0.2666μg/mL,а-VE=25μg/mL, 2 3 β-VE=25μg/mL,γ-VE=25μg/mL,δ-VE=25μg/mL 图1VA标样色谱图（DAD，325nm） Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHI