高效液相法在山梨糖发酵液检测中的应用.docVIP

高效液相色谱法测定山梨糖发酵液中的山梨糖和山梨醇 张宏霞 范登科 王娜* 闫荣哲 董秋云 （石药集团维生药业（石家庄）有限公司，河北石家庄 050035） 中图分类号：O 652.63 Application of HPLC in determination of sorbose and sorbitol in sorbose zymotic fluid ZHANG Hong-xia FAN Deng-ke WANG Na* YAN Rong-zhe DONG Qiu-yun （CSPC Weisheng pharmaceutical (Shijiazhuang) CO., LTD., Shijiazhuang Hebei 050035, China） 山梨糖发酵液是维生素C生产过程中的重要中间产物，它是由山梨醇经菌种发酵后生成的主成份为山梨糖的发酵液[1-5]。在发酵过程中，准确掌握发酵中各成份变化，判断发酵是否完全或过度发酵尤为重要。现有的应用于实际山梨糖发酵液检测的工业分析方法主要是滴定法，该方法操作过程较为繁琐、使用有毒有害化学试剂、单次滴定只能检测糖含量且不能同时掌握发酵变化情况等[6]。除此以外，将仪器分析应用于工业检测山梨糖发酵液尚未见报道[7-10]。通过试验分析，结合生产工艺及被检测物质的性质，本工作采用高效液相色谱法对山梨糖发酵液中山梨糖和山梨醇进行检测。该方法操作简便，避免使用有毒有害化学试剂，可同时定量分析山梨糖及山梨醇的含量。 1 试验部分 1.1 仪器与试剂 600型Waters 高效液相色谱仪；2414型示差折光检测器；山梨醇；山梨糖。 山梨糖标准溶液：称取山梨糖标准品100mg，用水溶解，定容于100mL容量瓶中，根据检测需要配制相应浓度的标准溶液。 山梨醇标准溶液：称取山梨醇100mg于100mL容量瓶中，用纯化水稀释至刻度。逐级稀释该溶液制备所需浓度的标准溶液。 1.2 仪器工作条件 色谱柱：Shim-Pack SCR-101C（7.9mm×300mm）；流动相：纯化水；检测器：Waters-2414示差折光检测器；流量为1.0mL·min-1；柱温为80℃；进样量为20μL；被测样品经0.22μm的滤膜过滤后，进行色谱分析。 1.3 试验方法 收稿日期：2010-01-01 修订日期：2010-11-01 作者简介：张宏霞（1970-），女，河北石家庄人，，主要从事。μm有机滤膜过滤后，移取滤液1.0mL至50mL容量瓶，用水稀释至刻度，用0.22μm有机滤膜过滤后液相色谱分析。同时用斐林试剂滴定山梨糖，计算发酵液收率，判定发酵终点并与液相检测结果对比。 2 结果与讨论 2.1 专属性 在色谱条件下，山梨糖和山梨醇标准溶液的色谱图见图1。 液相色谱检测山梨糖及山梨醇标准溶液，由于响应时间不同，可检测山梨糖发酵液中是否存在山梨醇，以判断是否发酵完全，液相色谱图如图1所示。 1.山梨糖 2. 山梨醇 ·L-1山梨糖及山梨醇标准溶液6次，分别计算山梨糖及山梨醇标准溶液测定浓度的相对标准偏差RSD，考察该方法的精密度，其结果≤0.5%，符合检测标准，见表1。 表1 山梨糖及山梨醇标准溶液精密度 Tab. 1 Precision of sorbose and sorbitol standard solution 名称 1 2 3 4 5 6 RSD/% 山梨糖峰浓度/ g·L-1 1.03 1.04 1.03 1.03 1.03 1.03 0.40 山梨醇峰浓度/ g·L-1 1.03 1.03 1.03 1.04 1.04 1.03 0.49 同时进行加标回收试验，向山梨醇和山梨糖浓度为1.0g·L-1的溶液中加入1.0g·L-1的标准山梨糖和山梨醇溶液，试验结果见表2 计算公式为： 回收率（%）=（—测定值）/ × 100% 表回收率Percent recovery of sample solution 山梨醇测定总量/ g·L-1 2.01 2.02 2.01 2.00 2.01 山梨醇回收率/% 100 101 100 99 100 山梨糖测定总量/ g·L-1 2.01 2.01 2.02 2.02 1.99 山梨糖回收率/% 100 100 101 101 98 如表2所示，通过分析，计算实验数据得出结论，山梨醇及山梨糖的样品溶液回收率平均值均为100%，满足要求。 2.3 线性回归方程、相关系数 按试验方法对山梨糖和山梨醇系列标准溶液进行测定，山梨糖和山梨醇的质量浓度在0.5~5.0 g·L-1范围内与其峰面积呈线性关系。线性回归方程分别为山梨糖Y = 133168ρ - 3537.6，相关系数为0.9997；山梨醇为Y = 13025