α-淀粉酶系列实验
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(云南大学 生命科学学院 生物学基地班xx)
摘要:α-淀粉酶作用于淀粉时可从分子内部切开α-1,4糖苷键,而生成小分子糊精和还原糖,产物末端葡萄糖残基C1碳原子为α-构型,故称为α-淀粉酶。α-淀粉酶是一种重要的酶制剂,大量应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。α-淀粉酶系列实验包括α-淀粉酶酶活力(碘比色法和DNS法)的测定、α-淀粉酶产生菌株(细菌)的分离纯化及检测、菌株摇瓶发酵初筛、复筛及酶活力测定、产α-淀粉酶菌株产酶培养基组成优化正交试验、α-淀粉酶酶蛋白的提取和纯化和酶(纯化后)生物学特性的测定七个方面的内容。通过本系列实验,我们不仅掌握了关于酶的基本实验操作技术,而且对酶特别是α-淀粉酶的特性也有了更深刻的理解。
关键词:α-淀粉酶,发酵培养,分离提纯,酶活力测定
1、材料和方法
1.1、α-淀粉酶酶活力测定(碘比色法)
酶促催化反应分解淀粉等底物(反应物)产物为麦芽糖、糊精等。反应式:淀粉→红色糊精。淀粉及糊精检测原理:碘检测,即淀粉(紫蓝色,30分子以上)→红色糊精(红棕色,7-30分子)→无色糊精,7分子以下)→麦芽糖(不显色)→葡萄糖(不显色)。具体方法如下:
1.2、α-淀粉酶产生菌株(细菌)的分离纯化及检测
分离培养基:利用相关含淀粉平板培养基进
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