ProtocolC：血清或血浆中miRNA富集部分的提取。.pdfVIP

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2017-09-14 发布于重庆
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ProtocolC：血清或血浆中miRNA富集部分的提取。.pdf

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TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD. Order: 010 Technical: 01059822665 Protocol C: 血清或血浆中 miRNA 富集部分的提取。 Toll-free: 800-990-6057 1. 样品处理：每 200ul 血清或血浆中加入等体积裂解液 MZ，振荡器振荡混匀 30s. 2. 室温放置 5 分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 3. 室温 12,000 rpm (~13,400×g) 离心 10 分钟，取上清，转入一个新的无 RNase 的离心管中。 4. 加入 200μl 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡 15 秒，室温放置 5 分钟。 5. 室温 12,000 rpm (~13,400×g) 离心 15 分钟，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA 主要在水相中，把水相转移到新管中，进行下一步操试剂盒内容：作。 6. 量取转移液的体积，缓慢加入转移液体积 1/3 体积的无水乙醇（如：300μl 的转移试剂盒组成 DP501 液加 100μl 无水乙醇），混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起 (50 次) 转入吸附柱 miRspin，室温放置 2 min, 室温 12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 秒，裂解液 MZ 60ml 离心后弃掉吸附柱 miRspin，保留流出液。漂洗液 RW 15 ml 7. 量取流出液的体积，缓慢加入流出液体积 2/3 体积的无水乙醇（如：300μl 的流出去蛋白液 MRD 12ml 液加 200μl 无水乙醇），混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起