改良酶法乙醇测定试剂的研制及性能考察.pdfVIP

中国人民公安大学学报(自然科学版) 兰Q!!±箜!塑堕!：!!Q!! 篁笙!!塑墅堡!三 改良酶法乙醇测定试剂的研制及性能考察 王 珂 (公安海警学院，浙江宁波315801) 摘要 目的探讨建立一种酶法测定血乙醇的试剂。方法：采用酶法测定血乙醇反应前后吸光度的变化率，求 得样本中乙醇的浓度。结果批内精密度试验显示试剂测定高低浓度样本CV值分别为0．7％和1．6％；线性范围 为0～2．54 6X一0．034 g／L；与申能一德赛试剂比较Y=1．022 3，R2=0．9984；抗干扰试验表明：344斗mol／L结合胆红 素，2．2mM维生素C，26mM甘油三酯，5 g／L血红蛋白，25．2mM肌酐，134mM葡萄糖，390mM尿素对检测结果无 干扰。结论本试剂方法简便，结果精确，线性范围宽，试剂稳定，可用于临床样本检测。 关键词 乙醇；酶法；试剂 中图分类号D918．93 0引言 1材料与方法 乙醇的成瘾性和滥用是当今世界范围内最严重 1．1 材料 的社会经济和公共卫生问题之一…，近年来，酒后 维生素C为上海生工生物工程有限公司产品， 引起的刑事案件和交通事故案件不断上升，2011年 5月1日《中华人民共和国刑法修正案(八)》正式批号：80DH066，为华瑞制药有限公司产品；游离胆 实施，醉酒驾驶作为危险驾驶罪被追究驾驶人刑事 红素及结合胆红素：购于百灵威科技有限公司，批号 责任。目前，许多国家都制定了血中乙醇浓度与交 通事故责任认定的关系，因此，血中乙醇检验在此类 案件的审理中至关重要。2。1。目前生物样品中乙醇 全自动生化分析仪(日本岛津公司)；pH数字式酸 定量测定的参考方法为气相色谱法，但该法仪器昂 度计FE20(梅特勒一托利多)。 贵，手续复杂不便推广一o，而酶法分析中乙醇脱氢 1．2方法 1．2．1检测原理 酶(Alcoholdehydrogenase，ADH)对乙醇是相对特异 的，不会与甲醇、丙酮或异丙醇等起催化反应，因此 样本中的乙醇在ADH催化下生成乙醛，同时将 准确度和精密度较高，并且可在紫外／可见光分析仪 等量的氧化型辅酶I(B．NAD)还原成还原型辅酶I 或半、全自动生化分析仪上进行测定，速度快，与气 (NADH)，在340nm波长处检测吸光度变化，参照 相色谱法相关性好_“j，因此应用前景较广。但由 乙醇标准液吸光度变化可计算出样本中乙醇浓度。 1．2．2试剂配制 于ADH在酸性(pH低于6．0)或碱性(pH大于 8．5)条件下极不稳定，并且重金属和使用的反应促 试剂1：100mM焦磷酸钠一甘氨酸缓冲液(pH 进剂如氨基脲盐酸盐等对其有明显抑制作用‘5。71， 9．1)，10g／L氨基脲盐酸盐，1g／L叠氮钠；试剂2： 因此目前该试剂多制成干粉试剂，复溶后也须尽快 100 mM KU／L 使用，无法满足实际检测需求。本文对酶法血乙醇 6．7)，30 B-NAD，40ADH，1 g／L牛血清白 检测试剂进行了改良并对相关性能进行了评价，报 蛋白(BSA)，0．5mM乙二胺四乙酸二钠(EDTA一 告如下。 2Na)，1g／L叠氮钠。 作者