丹皮酚与溶菌酶相互作用研究.pdfVIP

第44卷第4期 郑州大学学报(理学版) V01．44No．4 2012年12月 J．ZhengzhouUniv．(Nat．Sci．Ed．) Dec．2012 DOI：10．3969／j．issn／1671—6841．2012．04．018 丹皮酚与溶茵酶相互作用研究 王 玲1， 陈凌霞1， 毛烨炫2， 高桂园2， 杨 冉2 摘要：在生理pH条件下，应用荧光光谱法研究了丹皮酚与溶菌酶的相互作用．结果表明，丹皮酚与溶菌酶反应生 成新的复合物，荧光猝灭机制为静态猝灭，结合力类型主要为疏水作用力，结合距离小于7nm．最后考察了金属离 子Zn“、Cu“、Fe3+、A13+对此反应的影响． 关键词：丹皮酚；荧光光谱；溶菌酶；相互作用 中图分类号：0657．39 文献标志码：A 文章编号：1671—6841(2012)04—0083—04 0引言 丹皮酚又称芍药酮，是中草药牡丹皮(cortexmoutan)的主要活性成分，具有广泛的药理活性，包括抗肿 瘤、抗动脉粥样硬化、促进微循环、增强免疫力等‘1J．溶菌酶是一种广泛分布于生物体内的碱性蛋白，长期以 J． 来一直被作为一种模型体系，用于研究蛋白质的空间构象、酶动力学以及分子进化、分子免疫间的关系’2 同时它也是生物体内不可或缺的重要的非特异性体液免疫因子，能和很多的外源和内源性物质结合，具有 抗菌、消炎、抗病毒等诸多的生物功能∞J．目前，药理活性小分子与生物大分子的相互作用越来越受到人们 的广泛关注，特别是关于其作用机理的探讨．但有关丹皮酚与生物分子的相互作用的研究报道较少一～。，与 溶菌酶的相互作用的研究尚未见报道． 在接近人体pH的条件下，作者用荧光光谱法研究了丹皮酚与溶菌酶相互作用的光谱特征，深入探讨了 丹皮酚对溶菌酶荧光猝灭的机理及其对溶菌酶构象的影响． 1材料与方法 1．1仪器与试剂 子分析天平；巩义予华DF一101S型恒温仪；PHS．3C型酸度计． mol／L的溶 溶菌酶(sigma，纯度99％)：称取一定量溶菌酶溶于二次重蒸水，配制成浓度为1．0×10‘4 10。4 mol／L mol／L的NaCl水溶液)．实 mol／L的溶液．0．1 pH=7．0Na2HPO。一NaH2P04缓冲溶液(内含0．5 验所用试剂均为分析纯，实验用水为二次重蒸水． 1．2实验方法 mL溶菌酶及一定量的丹皮酚溶液，最后用二次 在10只5mL容量瓶中，依次加入2mL缓冲溶液，0．05 nm范 重蒸水定容至5mL．激发波长280nm，激发和发射光谱狭缝宽度均为5nm，低速扫描试样在300～500 围内的荧光猝灭光谱及同步荧光光谱． 收稿日期：2012—03—20 基金项目：河南省教育厅基金资助项目，编号128150031；河南省科技厅基金资助项目，编号102102310321 作者简介：王玲(1979一)，女，讲师，硕士，主要从事药物分析研究，E-mail：zztcchemistry@163．con． 万方数据 郑州大学学报(理学版) 第44卷 2结果与讨论 2．1 丹皮酚对溶菌酶荧光光谱的影响 am处 nm左右；随着丹皮酚浓度的不断增加，340 由图1可以看出，溶菌酶的荧光最大发射波长在340 的荧光强度有规律地猝灭，但是