G001 锐博生物——基于新一代测序的免疫组学研究.pdfVIP

No.G001-1308 T C 基于新一代测序的免疫组学研究 R 多 样 性 —TCR多样性测序 研究背景 研究对象和取材 T 细胞受体 （T cell receptor，TCR）是 T 细胞表面特 研究对象：肿瘤免疫、自身免疫性疾病、移植免疫监 异性识别抗原和介导免疫应答的分子，是人类基因组中多态 测、疫苗注射免疫监测。 性最高的区域之一，决定着人的免疫系统如何适应环境的变 取材：富含T淋巴细胞或B淋巴细胞的血液或组织液， 化。T 细胞受体库的多样性（包括基因重组以及选择性表达） 4 分离的淋巴细胞1x10 。 直接反映了机体免疫应答的状态。TCR 可分为 TCRα/β 和 TCRγ/δ两种类型 , 外周血 T 细胞主要为 TCRα/β 的 T 细胞 , 是介导机体特异性细胞免疫反应的主要细胞。如 测序流程 图 1 所示：TCRβ基因由可变区（V）、多变区（D）、结合区 图2所示，从不同来源的物种分离获得T/B细胞，富集 （J）和恒定区（C）四部分基因片段组成，形成互补决定区 TCR序列，进行高通量测序，结合生物信息学分析获得 （complementarities determining region, CDR）和 间 隔 TCR重组的信息。图3展示了TCR序列富集的方法。 的 4 个骨架区（framework region, FR）。在 T 细胞发育过 程中 CDR1，2 和 FR 区域相对保守，CDR3 区由 V、D 和 J 进行重排而形成具有功能的 TCR 编码基因 （T 细胞克 隆），由于 V (65-100 种 )、D (2 种 )、J (13 种 ) 基因片段 本身具有多样性，此外，由于在重排的过程中，在 VD 及 D-J 的连接区经常有非模板的核苷酸的随机插入或删除，进一步 增加了 CDR3 区的多样性（连接形成的多样性约为 2 11 ）。这种基因片段连接的不准确性使 TCR 的表达呈多 ×10 样性 , 以识别各种不同的抗原。正常个体在无抗原刺激时， TCR 基因重排是随机的，因此正常人外周血 T 细胞呈多家 族、多克隆性特点。不同抗原（肿瘤、疫苗、病原微生物或者移 植物等）刺激后，TCR 基因可对该抗原产生特异性识别，并 使带有这类基因的 T 细胞得到优势扩增，可用于分析不同 TCR V 亚家族 T 细胞的表达和利用。 图2. 测序流程图(Benichou J, et al. Immunology. 2012) A