一种包装 AAV2 5 的重组单纯疱疹病毒的构建.pdfVIP

第 2 2 卷 　第 4 期 病　　毒　　学　　报 Vol. 22 　　No. 4 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2 0 0 6 年 7 月 CHINESE JOURNAL OF VIROLO GY J uly 　 　2 0 0 6 一种包装 AAV2/ 5 的重组单纯疱疹病毒的构建 连忠辉1 ,2 # , 袁振华2 # , 吴小兵1 ,2 ( 1. 中国疾病预防控制中心 　病毒病预防控制所 　病毒基因工程国家重点实验室 ,北京 　100052 ; 2. 本元正阳基因技术有限公司 　863 计划生物领域病毒基因载体研发基地 ,北京 　100176) 摘要 :为了得到一种可以包装 AAV2/ 5 和表达绿色荧光蛋白的重组单纯疱疹病毒 ,设计并构建了一个由 AAV2 rep ( 基因和 AAV5 cap 基因嵌合而成的 rep 2 cap 5 基因 ,然后 ,利用一套携带 HSV1 基因组的粘粒系统 cos6 、cos28 、 cos14 、cos56 、cos48) ,将 rep 2 cap 5 基因插入 cos6 粘粒上 HSV1 基因组片段的 UL2 基因中 ,而将 EGFP 的表达单位插 ( ) 入 cos56 粘粒上 HSV1 基因组片段的 UL44 基因中 ,用这 2 个重组粘粒与其它 3 个粘粒 cos14 、cos28 、cos48 共转染 BHK21 细胞获得了重组病毒 HSV1r2c5EGFP 并进行了空斑纯化。HSV1r2c5EGFP 病毒能够在 BHK21 细胞 连续传代 ,并且可以观察到几乎所有的感染细胞都能产生绿色荧光。用 PCR 方法以及 Southern 杂交方法表明所 获得的 HSV1r2c5EGFP 中携带有 rep 2 cap 5 基因 , 用 HSV1r2c5EGFP 感染携带报告基因 L acZ 的 AAV 载体细 胞株 ,获得了具有感染性的重组 AAV2/ 5LacZ 。结果表明 ,所获得的重组单纯疱疹病毒 HSV1r2c5EGFP 可提供 AAV2/ 5 载体包装所需的全部辅助功能 ,是一种能简便、高效制备重组 AAV2/ 5 病毒的通用性辅助病毒。 关键词 :单纯疱疹病毒 ; 腺相关病毒 ; 辅助病毒 + ( ) 中图分类号:R373. 1 1 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000 - 8721 2006 04 - 0267 - 08 ( 　　腺相关病毒载体 adenoassociated virus vector , 由于 AAV 病毒本身是一种复制缺陷性的病 AAV vector) 无致病性 ,免疫原性低 ,安全性好 ,能转 毒 ,不能通过获得“毒种”连续扩增繁殖 ,而需要有辅 ( ) 导种类众多的组织细胞 ,并能长期稳定地表达其携 助病毒 如腺病毒 ,疱疹病毒 存在才能完成产毒性 带的基因 ,这些特性使其十分适合于作为体内基因 生活周期。目前国际上通用的 AAV 制备方法是采 转移的工具[1 ]