一种融合抗体 通用表达载体的构建.pdfVIP

中国生物工程杂志 一种融合抗体 通用表达载体的构建 王丁丁 苏曼曼 胡丽莉 袁丽颖 孙艳 汪 炬 颜炜群 广东药学院生命科学与生物制药学院广州 吉林大学药学院长春 暨南大学生命科学技术学院广州 吉林大学附属第三幼儿园长春 摘要 为了构建一个可供自由替换的区表达人小分子融合抗体的通用载体利用 技术扩增人抗体 的 片段克隆至毕赤酵母表达载体 将一段人工合成的互补寡核苷 酸链插入重组载体中区的上游引入 个可供小分子抗体的区自由替换 的限制性酶切位点 分别扩增人抗狂犬病毒以及抗乙型肝炎表面抗原的片段克隆至已构建的通 用载体在毕赤酵母中诱导表达 进一步在条件下对活性抗体进行发酵并利用 亲和层析柱进行纯化 应用酵母基因组 活性检测等试验对此小分子抗 体的表达进行生物学及免疫学分析 结果表明具有狂犬病毒抗原结合活性以及乙肝表面抗原结合活 性的人源抗体分子均获得成功表达 发酵条件下表达量达到 亲和层析纯化后 纯度 研究构建了可用于功能性抗体分子 筛选和表达的通用载体并对其发酵 纯化条 件进行了摸索为重组抗体分子诊断治疗试剂的开发以及抗体的人源化奠定了物质基础 关键词融合抗体通用载体表达毕赤酵母 中图分类号 年和采用大肠杆菌首先表达了 流程使融合抗体在临床的大量应用成为可能 活性抗体片段基因工程抗体技术开始兴起 基因工程 为了实现这一目标建立一个可用于生产针对不同特异 抗体或消除了天然抗体的一些不利于应用的特性或增 性抗原的融合抗体表达系统我们设计将人 加了新的生物学功能拓展了抗体的应用范围改善了抗 的段克隆至毕赤酵母表达载体 上再将 体的应用性能 时至今日基因工程抗体已在多个领域 一段人工合成的互补寡核苷酸链插入区的上游引入 得到了广泛的应用其中单链抗体及其不同形式的融合 个可供融合抗体的区进行自由替换的限 蛋白更是受到了研究人员的青睐已有研究证实单链抗 制性酶切位点构建出通用表达载体 体片段融合蛋白作为体内外检测诊断试剂具有良好的 并保留了纯化标签然后分别将人源抗狂犬病毒 特异性以及敏感性 但是常常显示聚集倾向 以及抗乙型肝炎表面抗原的抗体片段克隆至已构 尤其在时的稳定性较差这与轻重链可变区是 建的通用载体 中在毕赤酵母中进行诱导表 由