尖吻蝮蛇出血毒素分离纯化及其抗体在蛇毒鉴别中的应用.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（３）：１２３１２９ 尖吻蝮蛇出血毒素分离纯化及其抗体 在蛇毒鉴别中的应用 郑　颖　张　绎　叶锋平　聂雪峰　张志晓　邱　薇　范泉水 （成都军区疾病预防控制中心　昆明　６５００３２） 摘要　目的：纯化尖吻蝮蛇毒出血毒素，制备其特异性抗体，并建立该抗体对多种蛇毒的ＥＬＩＳＡ 检测方法。方法：利用多种层析技术从尖吻蝮蛇蛇毒中分离得到出血毒素，利用该蛋白作为抗原 免疫家兔，通过分步盐析和ＰｒｏｔｅｉｎＧ亲和层析法从免疫血浆中纯化ＩｇＧ抗体，ＨＲＰ标记纯化的抗 体。用该特异性抗体ＥＬＩＳＡ法检测蝰科的五种蛇毒。结果：纯化的出血毒素ＨＰＬＣ检测纯度为 ９９．４９％，其特异性ＨＲＰＩｇＧ抗体能有效从各蝰科蛇毒中鉴别出尖吻蝮蛇毒，与各蝰科蛇毒交叉 反应＜１５％，检测的灵敏度为１０ｎｇ／ｍｌ。结论：利用纯化的抗尖吻蝮蛇蛇毒出血毒素抗体建立的 ＥＬＩＳＡ方法可快速准确地从多种蝰科蛇毒中鉴别出尖吻蝮蛇蛇毒。 关键词　尖吻蝮蛇　出血毒素　分离　抗体 中图分类号　Ｑ８１４ 　　毒蛇咬伤常见于热带、亚热带和温带地区，全世界 后，病人表现相同的体征。依靠病人主诉和临床表现， 每年被蛇咬伤人数在５００万，每年蛇伤死亡达 １２．５万 很难做出正确诊断，因此正确诊断伤人蛇种对正确的 ［１］ 人，１０万人终身残疾 ，蛇咬伤仍然是目前世界上特别 治疗具有重要意义。目前蛇类研究者建立了许多有价 ［２］ ［１０］ 是热带地区的一个影响健康的问题 。目前，抗蛇毒 值的免疫诊断技术 ，但一些检测蛇毒手段如免疫扩 ［３］ 血清被认为是最有效的治疗蛇咬伤的药物 。蛇咬伤 散、被动血凝试验、放射免疫分析、生物传感器检测法、 ［４６］ 后应用抗蛇毒血清治疗的不到５％ ，如果能够鉴定 荧光免疫检测法、聚合酶链反应法等，但由于技术水平 咬伤蛇的种类，单价抗蛇毒血清是首先考虑应用的。 的限制，这些方法在特异性、灵敏度或稳定性方面都尚 然而据资料表明，蛇伤患者中能够鉴定出咬伤蛇种类 ［１１］ 待改进，难于在临床广泛应用 。我国正式上市销售 的仅占 ［７］ ２０％ ，由于不能正确鉴定咬伤蛇的种类或者 的产品只有抗蝮蛇毒血清、抗五步蛇毒血清、抗眼镜蛇 在某一地区被不同种类的蛇咬伤后全身症状相似，在 ［１２］ 毒血清、抗银环蛇毒血清 ，如果不能鉴别伤人蛇种则 临床上，很难或者不可能确定使用哪种单价抗蛇毒血 无法应用正确的抗血清进行治疗，因此建立一种快速 清。错误的诊断咬伤蛇的种类和应用单价抗蛇毒血清 准确的蛇毒检测技术对于蛇伤的诊断与治疗有着十分 不仅造成价格昂贵的抗蛇毒血清的浪费，而且会导致 重要的意义。 ［８］ 治疗失败致病人死亡 。我国南方大多属热带、亚热 　　在蛇伤的实验室诊断技术中，免疫检测是其中最 带丛林茂盛地区，毒蛇在我国分布较广，数量较多，毒 主要的技术手段，但现有的免疫诊断技术大多是利用