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一株松褐天牛白僵菌菌株的初步研究 1 1 1 1 蔡三山, 王义勋 ,查玉平, 陈京元 （湖北省林业科学研究院 武汉 430075 ） 关键词：白僵菌； 松褐天牛； ITS 序列；分子鉴定 Preliminary Study on a Beauveria sp. Isolated from Monochamus alternatu Cai Sanshan Wang Yixun Zha Yuping Chen Jingyuan （Hubei Academy of Forestry Wuhan 430075 ） Abtract: Based on cultivation and extracting genomic DNA of a Beauveria sp. isolated from Monochamus alternatu , we amplified a DNA fragment, which length is about 500bp, with the fungal universal primers, ITS4 and ITS5. Sequence analysis shows that the length of ITS1 of this strain is 161bp, that of 5.8S is 158bp and that of ITS2 is 161bp. Phylogenetic analysis demonstrates that this strain maybe a new species of Genus Beauveria . Keywods: Beauveria sp；Monochamus alternatu ； ITS Sequence ； Molecular Identification 作为松材线虫的主要传播媒介，松褐天牛除了本身钻蛀寄主导致树势衰亡以外，它传播 的松材线虫病已给我国林业生产和国民经济造成了巨大的损失，作为松材线虫的有效传播媒 介，控制松褐天牛是防止松材线虫病传播蔓延的有效途径。虫生真菌作为一类重要的天敌生 物资源，其可贵的流行潜力始终吸引着人们。白僵菌属 Beauveria Vuill.是全球分布的最常 见的土壤虫生真菌（Rehner 等，2003 ）。尽管科学家们在开发白僵菌作为生物杀虫剂方面做 了大量的努力，但收效甚微，其主要原因就是在难于识别和鉴定白僵菌属的种，从而导致对 寄主范围、致病方式和致病过程中毒性代谢物的作用等的遗传背景的了解的缺乏（Rehner 等，2005 ）。本文利用基于ITS 序列的分子鉴定技术，对一株分离自松褐天牛的白僵菌菌株 进行了初步鉴定。 1.材料和方法 1.1 供试菌株 供试白僵菌菌株由福建农林大学森林昆虫实验室分离提供，该菌株寄主为松褐天牛， 编号为FJ-1。  通讯作者，E-mail: jingyuanchen@ 1.2 菌株保存和培养 将白僵菌菌株 FJ-1 试管斜面保存于 4 ℃，定期转管保存。从试管斜面上取一小块菌种 放于PDA 平板上，25 ℃倒置培养7 天，供提取基因组DNA 使用。 1.3 菌株基因组DNA 的提取方法 菌株基因组DNA 的提取方法参照Liu 等（2000 ）的方法。 1.4 引物的合成 根据真菌扩增 ITS 序列的要求合成真菌 ITS 序列通用引物 ITS-4 （5’- TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’）和ITS-5 （5’- GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’），引 物的合成由北京鼎国昌盛生物技术有限公司完成。 1.5 PCR 扩增条件 PCR 扩增的反应体系为25 μL， 反应组分为：10×reaction buffer 2.5 μL， 2.5mmol • L-1 MgCl2 1.5 μL，10 pmol•L-1 上下游引物各0.5 μL，1