优化组织块法体外培养新生SD大鼠原代成骨细胞与鉴定.pdfVIP

·员员圆源 · 安徽医科大学学报摇 粤糟贼葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽粤灶澡怎蚤摇 圆园员圆 杂藻责；源苑（怨） 优化组织块法体外培养新生 杂阅大鼠原代成骨细胞与鉴定 陈摇 强，夏摇 天，叶哲伟，宋谋珂 摘要摇 分别采用传统组织块法、传统酶消化法和优化组织块 法。 法进行新生杂阅大鼠原代成骨细胞体外分离和培养，并对培 员援圆摇 试剂和仪器摇 高糖阅酝耘酝培养基、胎牛血清 养出的细胞予以鉴定和比较。优化组织块法可短期内培养 购于郧蚤遭糟燥 公司； 型胶原酶、胰蛋白酶、源忆，远鄄二脒 Ⅰ 出大量纯度高的成骨细胞，具有典型的形态特征和成骨能 基鄄圆鄄苯基吲哚（阅粤孕陨）购于杂蚤早皂 公司；一抗兔抗 力，碱性磷酸酶（粤蕴孕）染色、 型胶原免疫荧光均呈阳性， Ⅰ 鼠、二抗羊抗兔（陨早郧鄄糟赠猿）购于粤遭糟 皂公司；牛血清 粤蕴孕检测活性可达怨圆豫。该法优于其他两种方法，提供了 蛋白（月杂粤 ）、磷酸盐缓冲液（孕月杂 ）、悦藻造造 悦燥怎灶贼蚤灶早 一种切实可行、操作简单的体外原代成骨细胞培养方法。 运蚤贼鄄愿（悦悦运鄄愿）、栽则蚤贼燥灶载鄄员园园鄄孕月杂（孕月杂栽）购于上海碧 关键词摇 成骨细胞；原代培养；鉴定 云天公司；碱性磷酸酶（粤蕴孕）染色试剂盒、粤蕴孕活性 中图分类号摇 砸猿圆怨援圆源 文献标志码 粤 文章编号 员园园园原员源怨圆（圆园员圆）园怨原员员圆源原园源 测试盒购于南京建成公司；其他相关试剂均为国产 分析纯试剂。仪器主要有匀耘砸粤 糟藻造造圆源园蚤 悦韵 培养圆 摇 摇 近年来，随着对骨组织工程的深入研究，作为 箱（匀藻则 藻怎泽 公司）；栽杂员园园 倒置相差显微镜（晕蚤噪燥灶 骨组织的主要功能细胞，成骨细胞培养和应用日趋 公司）；耘蕴曾愿园园 酶标仪（月蚤燥栽藻噪）；悦载源员鄄猿圆砸云蕴荧光 深入，在体外建立与体内生物学性状更相近的成骨 显微镜（韵造赠皂责怎泽公司）。 细胞模型是骨组织工程研究的基础［员］。目前，成骨 员援猿摇 方法 细胞原代培养的方法主要有两种：酶消化法和组织 员援猿援员摇 成骨细胞原代培养摇 将新生 杂阅 大鼠浸泡 块法。酶消化法虽可获得大量细胞，但操作方法复 于苑缘豫的乙醇缘 皂蚤灶，移入超净台内，取出颅骨，剔 杂，获得的细胞不纯，酶处理后对细胞膜表面受体和 除骨膜、血管和结缔组织等后放入培养皿中，加入含 抗原成分有损坏，并影响培养细胞的贴壁和成活 青霉素、链霉素 园郾园员 皂燥造辕 蕴 孕月杂液浸泡。然后用 率［圆原猿］。传统组织块法虽可获得纯度较高的细胞， 孕月杂冲洗猿次，剪碎，修整为约员皂皂伊员皂皂大小组 但细胞游出比较缓慢且数量少［源］。该研究拟充分 织块，再用孕月杂 液反复浸泡、洗涤。粤 组收集碎骨 结合酶消化和组织块法的优点，以期建立一种高效、 片，直接均匀接种于培养瓶中。月组收集碎骨片加 简便、可靠的组织块体外培养新生 杂阅 大鼠原代成 入园郾圆缘豫胰蛋白酶缘 皂造，振荡消化圆园 皂蚤灶（猿苑益 ）， 去除消化液，再次加入园郾员豫 型胶原酶缘 皂造，振荡 骨细胞的方法。 Ⅰ 消化远园 皂蚤灶（猿苑益 ）后加入源 皂造高糖阅酝耘酝培养基 员摇 材料与方法 终止消化