JZTX-IX对Kv2.1通道的作用机制研究.docVIP

  JZTX-IX 对 Kv2.1 通道的作用机制研究# 陶怀，吴远远，邓梅春，王美迟** （湖南师范大学生命科学学院，蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室，长沙 410081） 5 10 摘要： JZTX-IX 是一种从敬钊缨毛蛛毒液中分离纯化的 35 个氨基酸残基的多肽。JZTX-IX 能抑制电压门控钾通道 Kv2.1 电流，而且能减小通道去激活尾电流的时间常数，加速通道从 激活到关闭状态的转变速率，被认为是一种门控修饰毒素。根据毒素的同源性推测与 JZTX-IX 作用的受体部位是 Kv2.1 通道上电压传感器的 S3b-S4 浆叶结构（VS），但是 Kv2.1 通道该结构哪些氨基酸残基是与 JZTX-IX 作用的关键残基还不清楚。本研究对 Kv2.1 通道 电压传感器的 S3b-S4 桨叶结构的 21 个氨基酸残基进行单突变，分别检测 JZTX-IX 对该通 道突变体的作用，结果表明 Kv2.1 通道上 S3b-S4 浆叶结构的 I273、F274 和 E277 是关键活 性残基。 关键词：蛋白质；钾通道；电压传感器；门控修饰毒素 中图分类号：Q512 15 Molecular determinants for the tarantula toxin JZTX-IX interacting with potassium channel subtype Kv2.1 Tao Huai, Wu Yuanyuan, Deng Meichun, Wang Meichi (Key laboratory of protein chemistry and developmental biology of the ministry of education, the 20 25 30 35 40 college of life science, Hunan normal university, ChangSha 410081) Abstract: JZTX-IX is a 35 amino acid residues polypeptide, purified from the venom of Tarantula Chilobrachys jingzhao. JZTX-IX inhibited the voltage-gated potassium channel Kv2.1 current, reduced the time constant of deactivation tail current and speeded the channel transformation rate of state from activation to close,was considered to be the gating modifier toxins. The previous results showed that the receptor site of the Kv2.1 channels to JZTX-IX was S3b-S4 blade structure on voltage sensor, whereas the key residues did not unknown. In this study, the effects of JZTX-IX to 21 single mutations on S3b-S4 blade structure were detected and the results showed that the three amino acids I273, F274 and E277 on the S3b-S4 blade structure was the key active residues on Kv2.1 channel. Keywords: Protein Potassium channel; voltage sensor; gating modifier toxins 0 引言 Kv2.1 通道是一种重要的延迟整流型钾离子通道，广泛分布于中枢、中间神经元以及胰 腺 β 细胞膜上[1,2]。研究发现，Kv2.1 通道与细胞动作电位复极化相有关，可调节动作电位爆 发频率及兴奋性。Kv2.1 通道由 4 个相同 α 亚基聚合而成。其编码基因位于人常染色体 20q13.2[3]。α 亚基由约 800 个氨基酸残基组成，在细胞膜上形成 6 个 α 螺旋跨膜片段（S1-S6）， 其中 S4 富含正电荷残基，起电压敏感元件作用，而 S5 和 S6 及两者间的 P 发夹环结构组成 孔道结构[4]。诺贝尔奖得主 Roderick MacKinnon 利用 X-ray 晶体衍射法成功解