心肌肌钙蛋白I2C复合物酶联免疫检测方法的建立.pdfVIP

第 44 卷　第 4 期 ( ) Vol. 44 No. 4 复 旦 学 报 自然科学版 2005 年 8 月 Journal of Fudan Universit y (Natural Science) Aug. 2005 　　文章编号 : (2005) 心肌肌钙蛋白 IC 复合物酶联免疫检测方法的建立 李　瑞 , 朱乃硕 (复旦大学 生命科学学院 微生物学及微生物工程系 ,复旦金鹰生物医药研发中心 ,上海 　200433) ( ) 摘 　要 : 为了制备抗人心肌肌钙蛋白 I cTnI 单克隆抗体、建立检测人 cTnI 链酶亲和素生物素双抗体夹心酶联 ( ) 免疫吸附测定 EL ISA 方法 ,用基因工程表达的人 cTnI 免疫雌性 BALB/ c 小鼠 , 以杂交瘤技术制备得到三株特 异性抗人 cTnI 的单克隆抗体记为 6 G3 ,6A6 ,3 G9. 三株杂交瘤细胞中 6 G3 和 6A6 为 IgG ,3 G9 为 IgG ,腹水效 1 2b - 5 - 5 - 5 9 9 9 - 1 价分别为 4 ×10 ,4 ×10 和 10 . 亲和常数为 5. 0 ×10 ,6. 4 ×10 和 3. 8 ×10 mol . Western blotting 结果表 明6 G3 和 6A6 能够识别 cTnIC 复合物. 把 6 G3 抗体生物素化并制备抗 cTnI 、cTnC 和 cTnIC 的大鼠多克隆抗 体. 以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化 6 G3 抗体作为检测抗体 ,建立检测 cTnI 的双抗体夹心 EL ISA 方法并初 步应用于临床病人标本检测. 以cTnIC 复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性 ,灵敏度 为 0. 9 ng/ mL ,较包被其他抗体捕捉方法提高 1～2 倍. 批内变异系数为 5. 03 % , 回收率为 94. 56 %. 测定 17 例 AMI 病人和 18 例血清样本临床诊断结果符合率为 100 %. 关键词 : 心肌肌钙蛋白 I ; 心肌肌钙蛋白 C ; 单克隆抗体 ; 酶联免疫吸附测定 ; 生物素 中图分类号: Q 786 　　　　　文献标识码 : A ( ) 　　急性心肌梗塞 acute myocardial infarction ,AM I 等原因引起的心肌损伤严重危害人类健康. 欧洲心脏 病学会和美国心脏病学会于 1999 年 7 月重新修订了心肌梗死的定义1 . 心肌梗死新的定义把心肌损伤标 ( ) 志物 Cardiac Markers 的检测作为一项重要的诊断指标 ,为准确判断心肌梗死病情提供了一些较为科学、 ( ) β 有效、可行的手段. AST 、乳酸脱氢酶 LD 及其同工酶和 羟丁酸脱氢酶等一些早期使用的心肌标志物因 灵敏度和特异性都相对较差 ,在心肌损伤的诊断检测中已不再应用或逐步停用. ( ) 肌钙蛋白 troponin , Tn