原核表达及表达产物的活性鉴定.pdfVIP

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2017-09-14 发布于重庆
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原核表达及表达产物的活性鉴定.pdf

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( ) ( ) ISSN 1007 - 8738细胞与分子免疫学杂志 Ch in J Cell Mo l Imm unol 2005, 2 1 5 557 ·论著 · 文章编号 : 1007 - 8738 (2005) 05 - 0557 - 04 B irA 酶基因表达载体的构建、原核表达及表达产物的活性鉴定 ( ) 李　青 , 吴雄文 , 熊　敏 , 翁秀芳 , 卢小玲 , 梁智辉 , 龚非力华中科技大学同济医学院免疫学系 , 湖北武汉 430030 Prokaryotic expression of B irA enzym e (D E3) 中诱导表达 , 表达产物采用谷胱苷肽琼脂糖层析柱进行纯化。以带有生物素酶底物肽 ( B irA sub strate p ep tide, and iden tif ica tion of the b ioactiv ity of B SP) 的 HLA A2 肽复合物为底物 , 用 EL ISA 和 W e stern b lot expressed product 鉴定表达产物的生物素化活性。结果 : 构建了 p GEXB irA 原核表达质粒 , 并在大肠杆菌 BL 2 1 (D E3 ) 中诱导表达 M r 为 L I Q ing, WU X iong w en , X ION G M in, W EN G X iu 6 1 300 的 B irA 酶 GST融合蛋白, 表达产物经谷胱苷肽琼脂 f ang, L U X iaoling, L IAN G Z h ihu i, GON G F eili 糖层析柱纯化后 , 得到 N 端带有 GST标签的 B irA 酶蛋白。 D ep artm en t of Imm unology, Tongj i M edical Co llege of Huazhong EL ISA 和 W estern b lot的结果显示 , 表达产物能使 HLA A2肽 U n iversity of Sciences and Techno logy, W uhan 430030 , Ch ina 复合物生物素化。结论 : 成功地制备了具有生物学活性的