产毒微囊藻PCR检测方法的建立.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2013，41(1)：43—45 责任编辑 来琼琼 责任校对 卢瑶 产毒微囊藻 PCR检测方法的建立 周毅 ，徐晔，钱伟 ，姚燕林 ，王海涛 ，张敬友。，王维志 ，段宏安 (1．连云港出入境检验检疫局，江苏连云港 222042；2．苏州出入境检验检疫局，江苏苏州 215000；3．南京出入境检验检疫局，江苏南京210001) 摘要 [目的]建立产毒微囊藻的PCR检测方法。[方法]根据GenBank上发表的nwyA基因序列保守区域设计一对引物，建立和优化检 测产毒微囊藻的PeR方法，并以此方法检测产毒和非产毒微囊藻参考株系。[结果]经PCR检测，产毒藻株出现特异性扩增条带，而不 产毒株未出现特异性条带；以10倍系列稀释纯培养的蓝藻细胞作为PCR反应的模板，检测限均为2．46X10 ~g／ml；运用建立的方法 从天然水体中检测到了产毒微囊藻，对PCR产物序列进行 比对，发现 PCR扩增片段与铜绿微囊藻(PCC7806)核苷酸序列的同源性为 98％。[结论J该研究为水华产毒微 囊藻的监测提供 了一种新方法。 关键词 产毒微囊藻；mcyA；PCR；检测；同源性 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2013)01—00043～03 DevelopmentofPCRM ethodforDetectionofPotentialM icrocystin-producingMicrocystis ZHOUYietal (LianyungangEntry—exitInspection＆QuarantineBureau，Lianyungang，Jiangsu222042) Abstract [Objective]TheaimwastodevelopaPeRmethodfordetectionofpotentialmicrocystin—producingmicrocystis．[Method]Accord— ingtoconservedregionsofmcyAgenesequencesinGenBank，apairofprimerswasdesigned，andaPCRmethodofrthedetectionofmicrocys- tin-producingmicroeystiswasdevelopedandoptimized．Thenthereferencedmicrocystin-producingandnon—microcystin—producingmicrocystis strainsweredetectedbythismethod．[Result]Themicrocystin—producingmicrocystisstainsappearedspecificDNAbandandthenan—micro— cystin—producingmicroeystisstrainsdidn’tshow specificbandbythePCR test；theintactcellswere10timesdilutedandusedastemplate， andtheresultsindicatedthatthedetectionlimitofthemethodwasupto2．46X10 cells／ml；themicrocystin—producingmierocystiswasde— tectedfrom naturalwaterbyusingtheestablishedmethodandtheBlastN resultshowedthatthisPCRfragmentshad98％ homologytothatof Microcystisaeruginosa(PCC7806)．[Conclusion]Thisstudyprovidedanewmethodforthemonitoringofmieroeystin—producingmicrocystisin bloom． Keywords Toxigenicmicrocystis；mcyA；PCR；Detection；Homology 近年来，水体富营养化 已成为一个全球关注的环境问 表1 藻种及其来源 题 ，在富营养化水体中存在高浓度的营养性物质，如氮和磷 等，可促使藻类大量生长形成水华。在水华期问，产毒蓝藻 会释