第一章蛋白质的分离纯化.pptVIP

蛋白质的分离纯化 主要参考书 4 电泳：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，等电 聚焦电泳，双向电泳。 5 蛋白质鉴定 （1）蛋白质纯度鉴定 （2）蛋白质浓度测定 （3）蛋白质活性测定 蛋白质的结构研究  一级结构： （1）氨基酸组成分析 （2）末端分析 （3）肽谱分析 二级结构： （1）紫外光谱法 （2）荧光光谱法 （3）红外光谱法 （4）圆二色性法(CD谱) （5）激光拉曼光谱法 高级结构：（1）X－射线衍射法 （2）核磁共振法(NMR) 蛋白质结构与功能的关系 1.突变 2.晶体分析 3.蛋白与蛋白的相互作用 一. 材料获得 1 原核细胞表达 大肠杆菌 表达载体：目前较常用的是具有可诱导的T7启动子的表达载体，大部分蛋白均可获得表达而且表达量较高，表达量可占细菌总蛋白的25％以上。T7－RNA聚合酶的活性高于大肠杆菌RNA聚合酶，它只识别自己的启动序列，不能启动大肠杆菌DNA的转录，对抑制大肠杆菌RNA聚合酶的抗生素如利福平有抗性，因而可在利福平存在的条件下，使目的基因得到大量扩增。 宿主菌：细菌染色体上含有噬菌体T7－RNA聚合酶基因，它的启动子为Lac启动子，可被IPTG诱导。 融合蛋白：常用6－10组氨酸－融合蛋白，