靶向EGFR基因RNA干扰对人卵巢癌SKOV_3细胞增殖的抑制作用.pdfVIP

第31卷第 23期 第 三 军 医 大 学 学 报 Vo1．31，No．23 2338 2009年 12月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE Dec．2009 麓着 文章编号：1000—54042(009)23—2338—04 靶向EGFR基因RNA干扰对人卵巢癌 SKOV细胞增殖的抑制作用 郭启帅 ，黄 曦 ，吴永忠。，李少林 (重庆医科大学：放射医学教研室，附属第一医院血液科，重庆400016；重庆市肿瘤 研究所 ，重庆 400030) 摘 要：目的 利用RNA干扰技术下调表皮生长因子受体 (epidermalgmwlhfactorreceptor，EGFR)基因的表达，观察 其对卵巢癌SKOV细胞增殖的影响。方法 构建针对 EGFR基因的siRNA真核表达载体，转染入卵巢癌 SKOV细胞中， 并筛选稳定表达 siRNA的转化克隆，RT．PCR及Westernblot分别检测 EGFRmRNA和蛋白表达，流式细胞仪检测细胞周 期和凋亡，克隆形成实验及 MrIT法检测细胞克隆形成率及细胞体外的增殖情况。结果 成功构建表达质粒 pGenSil—HK、 pGenSil—EGFRI和pGenSil—EGFR2，并转染SKOV细胞 ，通过CA18筛选后获得稳定转染克隆，RT—PCR及 Westernblot分析 表明转染pGenSil—EGFR1、pGenSil—EGFR2后的细胞EGFRmRNA和蛋白表达均受到了明显抑制，EGFRmRNA抑制率分别 为41．87％和68．07％，蛋 白表达抑制率分别为45．21％和 70．25％。与未转染组和pGenSil—HK组相 比，pGenSil—EGFR2组 细胞凋亡比例显著增加，G期细胞增多，而 S期细胞减少 (P0．05)；转染pGenSil—HK组克隆形成率为 (0．82±0．03)，转 染 pGenSil—EGFR2组克隆形成率为 (0．61±0．04)，二者比较差异显著 (P0．05)，MTT显示细胞培养 36h后，pGenSil— EGFR2组的细胞生长均显著低于未转染组和转染pGenSil—HK组 (P0．05)。结论 靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑 卵巢癌SKOV，细胞中的EGFR表达，诱导细胞凋亡、调控细胞周期再分布、抑制细胞增殖。 关键词：RNA干扰；表皮生长因子受体；SKOV 细胞；细胞周期；凋亡 中图法分类号：R329．25；11394．2；R737．3l 文献标识码：A RNA interferencetargetingEGFR onproliferationofhumanovariancarcinomacell lineSKOV3 GUOQi—shuai，HUANGXi，WUYong—zhong，LIShao—lin(Depa~ment。fRadiati。nMedicine，DepartmentofHemat。1ogy， FirstAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016；CancerinstituteofChongqing，Chongqing400030，China) Abstract：Objective Toexploretheeffectofdown—regulatingepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR) expressionbyRNA interferenceontheproliferationofovariancarcinomaSKOV，cells．Methods Thereeombi— nanteukaryoticexpression plasmidspGenSil—HK．pGenSil．EGFR1andpGenSil—EGFt12 wereconstructe~1and transfectedintoSKOV1cellsrespectively．ThemR