超氧化物歧化酶.pdfVIP

302 食品与药品 Food and Drug 2010年第 12卷第07期 · · 知识介绍 超氧化物歧化酶 Irwin Fridovich （美国杜克大学医学中心生物化学系，北卡罗莱纳州 达勒姆，27710） 1 简介 态浓度，才能使得超氧 自由基与酶的碰撞速率远远大于与 呼吸细胞中普遍存在一种奇特的酶活性，底物是一种 另一O2- 的碰撞速率。据估计人类肝脏内SOD 的浓度至少为 能在任何瞬间微量存在的不稳定 自由基，即使在此酶缺失 3 ×10-5 mol/L ，而O2- 的稳态浓度必须比SOD 的浓度至少低 的情况下，这种催化反应也能快速进行。然而这种酶对于 5个数量级，使得O - 5 2 的酶催化清除反应至少加快10 倍。这 需氧细胞的存活是至关重要的，它可以催化清除超氧 自由 两个因素的结合，将使肝脏内O2- 在pH 7.4 时的酶催化清除 基，因而可以抵御氧中毒，因为超氧 自由基是产生氧中毒 反应至少比自发清除反应快109倍。 的重要物质。超氧 自由基清除反应是歧化反应，这种酶可 3 SOD 的活性分析 提高反应速率，反应式如下。 对于酶的生产研究，其首要要求是快速准确的检测方 O - + O - +2H+ → H O + O 法。对SOD而言，由于其底物不稳定，要达到这一 目标需 2 2 2 2 2 2 超氧自由基和歧化反应 要费些周折。将产生O2- 的反应和O2-指示清除剂联合在一起 O2- 是氧还原的一种常规媒介，这是氧分子在基态时 是一种成功的策略。在这种情况下，SOD与指示清除剂竞 更倾向于单价还原途径的结果。产生O2- 的反应很多，如对 争O2- ，从而抑制了清除剂与O2- 的反应。有氧条件下，黄嘌 苯二酚、无色核黄素、儿茶酚胺、硫醇、还原染料、四氢 呤氧化酶作用于黄嘌呤会产生O2- ，该反应可以通过O2-对细 蝶啶、铁氧化还原蛋白、红氧化还原蛋白和血红素蛋白等 胞色素c 的还原能力检测到。还原型细胞色素c在550 nm有 的 自氧化反应。此外，很多酶促反应也可产生O2- ，包括 最大吸收，而SOD存在时会抑制细胞色素c 的还原反应。 黄嘌呤氧化酶、醛氧化酶、二氢乳清酸脱氢酶及一系列黄 SOD 的一个活性单位可定义为在特定条件下抑制细胞色素 素蛋白脱氢酶。很多氧化酶和羟化酶可被超氧化物歧化酶 c 还原率达50 % 的酶量。在SOD 的首次分离中，该分析方 - （SOD ）抑制，这显示O2 是这些酶催化循环的媒介，如色 法的灵敏度为一个活性单位相当于0.1 μg/mL 的酶。此灵敏 氨酸二加氧酶、重建肝微粒体羟化酶、黑曲霉源可溶性羟 度还可通过提高pH和降低细胞色素c 的浓度而被大幅提高。 化酶和半乳糖氧化酶。最终，O -