光学滤光片--适用于基于激光的荧光显微镜（中文）-Semrock.pdfVIP

Semrock 技术文档技术文档系列系列 技术文档技术文档系列系列 光学滤光片光学滤光片 光学滤光片光学滤光片 适用于适用于基于激光的荧光显微镜基于激光的荧光显微镜 适用于适用于基于激光的荧光显微镜基于激光的荧光显微镜 适用于适用于激光荧光显微镜激光荧光显微镜的光学的光学滤光片滤光片 适用于适用于激光荧光显微镜激光荧光显微镜的光学的光学滤光片滤光片 介绍介绍 介绍介绍 因为激光具有高亮度、稳定、长寿命及谱线窄等特性，它正逐渐取代了荧光成像应用中的传统宽带光 源。在成像应用中，激光的上述特性可提高可视化的灵敏度，也增加了光通量；激光更具有光束发散角窄、 高度的时空相干性、偏振特性明确等独有特性，从而催生了众多新的荧光成像技术。然而，相对于宽带光 源，当激光以荧光光源的形式出现时，为基于激光的成像系统 （如共聚焦和全内反射荧光（TIRF）显微镜） 及其组件提出了新的限制要求。尤其是对光学滤光片有着更特殊的要求。 针对激光光源进针对激光光源进行优化的行优化的光学光学滤光片滤光片 针对激光光源进针对激光光源进行优化的行优化的光学光学滤光片滤光片 在过去四十多年里，已开发出了许多强大、高效且性价比好的激光器。人们通常按增益介质和激励方 式对激光器进行分类。至今，最受欢迎的用于荧光成像的激光器仍为气体激光器 （如氩离子和氪离子激光 器）最常用的激光谱线为488、568和647nm。但在最近几年，由于固态激光器的 （电光转换）效率明显更 高（产生的热量更低，实验室安装更加简单）、尺寸更小，且成本更低，因此正在逐渐取代了体激光器。 比较流行的激光器类型包括半导体二极管激光器 （尤其是405和635nm）、光泵浦半导体激光器 （包括广泛 使用的488nm），以及倍频二极管泵浦固态 （DPSS）激光器（包括561nm的黄光激光器和较新的515nm和594nm 激光器）。表1总结了在荧光成像应用中最受欢迎的激光器。 激发滤光片：尽管尚有异议，但针对激光光源的消杂滤光片 （激发滤光片）是十分重要的，可用它阻 挡不想要的非激光线波长的光，包括固态激光器中自发发射和气体激光器的等离子线。这些滤光片不仅要 能够滤掉的无用光（ OD 6），对于激光线也应具有高透过率 （T95%）（请参见图1和3）。此外，这些 滤光片还要耐用，以承受高强度的激光束的照射。 与沿用了几十年的传统软镀膜的荧光滤光片不同，通过离子束溅射制作的新型硬镀膜的薄膜滤光片具 有很高的激光损伤阈值 （LDT）等级。Semroc 生产的的激光滤光片通常具有 1焦耳/平方厘米或更高的 LDT 等级，适用于强脉冲激光。对于连续 （CW）激光器，该LDT等级相当于 10-100 千瓦/平方厘米。此外，硬 镀膜滤光片几乎不受温度和湿度引起的环境退化的影响；由于具有高光学耐久性以及稳固的环境可靠性， 在大多数荧光显微镜应用中无需更换滤光片。 表1表1：：常用荧光激光器常用荧光激光器 表表11：：常用荧光激光器常用荧光激光器 “DPSS”= 二极管泵浦固态激光器 “OPS”= 光泵浦半导体激光器“倍频”= 通过非线性光学晶体实现倍频 激光谱线激光谱线 激光器类型激光器类型 常用荧光常用荧光 激光谱线激光谱线 激光器类型激光器类型 常用荧光常用荧光 TM ~405nm 二极管 DAPI、Hoechst、Alexa Fluor 405 、BFP ~440nm 二极管 473nm 倍频DPSS 488.0nm 氩离子气体 G