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科技创新导报 2009 NO.16 Science and Technology Innovation Herald 技 术 创 新 微生物脂肪酶纯化方法研究进展① 1 2 1 3 3 李永莉 吕新宇 周斌 张启蒙 李树白 (1.常茂生物化学工程股份有限公司 江苏常州 213034; 2.江苏工业学院精细化工研究所江苏常州 213164; 3.常州工程职业技 术学院化学工程技术系 江苏常州 213164) 摘 要:本文通过对比不同来源的脂肪酶的分离纯化方法,综述了近年来国内外研究人员在微生物脂肪酶分离纯化方面的研究进展。 关键词:微生物脂肪酶 纯化方法 研究进展 中图分类号:TQ641 文献标识码:A 文章编号 脂肪酶的分离和纯化是研究其酶学性 性较水低的界面都有较高的亲和力,这些 除菌丝体、超滤浓缩酶液、硫酸铵盐析或有 质、结构与功能的基础,是整个脂肪酶研究 界面可以不可逆地吸附脂肪酶,使得脂肪 机溶剂萃取等步骤。预纯化过程之后,一般 [1] 再用层析方法进一步分离以获得高纯度的 中很重要的一个环节。Rolf等 认为在脂肪 酶很容易失活。除了以上两个因素外,分离 酶的分离纯化中,主要存在以下几个问题: 纯化时间长,回收率低,成本过高也是一个 脂肪酶。层析方法包括离子交换层析(Q- (1)微生物发酵合成的是包括脂肪酶在内的 值得关注的问题。 Sepharose)、凝胶过滤层析 酶的混合物,从而给下游的酶分离纯化造 脂肪酶分离纯化的过程一般包括预纯 200 SF)、亲和层析等方法。一般用酶活回收 成压力,而且脂肪酶还有可能被蛋白酶分 化过程和层析分离两个过程。预纯化过程 率、比活力和纯化倍数等指标来衡量脂肪 解;(2)脂肪酶不仅对油－水界面,而且对极 包括细胞破碎(胞内脂肪酶)、离心或过滤去 酶分离纯化的程度。本文根据脂肪酶来源 的不同,对其分离纯化方法进行分类对比。 表1革兰氏阳性细菌产脂肪酶的分离纯化 　　 1细菌类 细菌类可以产脂肪酶的菌属的种类较 多,主要分两大类:革兰氏阳性细菌和革兰 氏阴性细菌,革兰氏阳性菌又包括芽孢杆 菌属,乳酸杆菌属,葡萄球菌属链球菌属, 微球菌属,丙酸菌属等,革兰氏阴性菌又包 括假单胞菌属,气单胞菌属等。 1.1革兰氏阳性细菌 从此类菌属中分离纯化脂肪酶的研究 主要集中在芽孢杆菌属。Sharma等研究了